2服从与合成

2.1基因组DNA的肠道肠埃提取

运用NanoDrop2000对于提取的CMCC44841基因组DNA妨碍了纯度测定，A260/280以及A260/230分说为1.70以及2.37。汇聚运用qubit荧光计对于提取的性大希氏EAECDNA测定了浓度为65ng/µL，提取的菌菌DNA可能知足后续全基因组测序以及规范物资制备的试验要求。

2.2全基因组测序合乐成果

本钻研运用二代高通量全基因组测序技术对于CMCC44841妨碍了序列测定。体及取患上的规范基因组序列信息服从经由生物信息学合成，CMCC44841基因组巨细为5.057285Mb，物资其N50重叠巨细为114319bp，肠道肠埃共121个长度从305600bp到505bp不等的汇聚contigs，GC含量为50.6%，性大希氏编码区基因5173个。菌菌运用CGE网站KmerFinder对于细菌妨碍种属判断，体及服从呈现CMCC44841判断为大肠埃希氏菌（Escherichiacoli），规范详尽判断服从如表2所示。物资同时运用CGE网站妨碍血清预料、肠道肠埃多位点序列分型（MLST）以及毒力基因合成，CMCC44841血清预料服从为O127：H21，MLST为ST40型，照料毒力基因除了aggR、astA、pic之外，还预料觉含有aap、aar、afaD、agg3C、lpfA、ompT等毒力基因，详见表3。CMCC44841全基因组测序数据已经上传至NCBI数据库，序列号为SRR12278211。

2.3特色性基因PCR扩增服从

遵照GB4789.6-2016的方式对于CMCC44841分说妨碍了astA、aggR、pic特色性基因检测。PCR扩增服从呈现提取的CMCC44841DNA分说扩增出102bp、400bp以及1111bp长度片断。区别浓度DNA扩增服从如图1所示，0.一、0.0一、0.001ng/µl的DNA均有特色性基因扩增产物，抉择CMCC44841DNA冻干小球规范物资运历时PCR的模板量≥0.1ng/µl，遵照20ng/球妨碍DNA规范物资的制备。

2.4规范物资的平均性魔难服从

随机抽取的20瓶EAEC菌体规范物资平板计数服从如表4所示。所有样品菌落数均在103CFU数目级，数值适宜正态扩散。SPSS软件单因子方差合乐成果呈现，F=1.59＜F临界值=2.137，P＞0.05。表明在清晰水平为0.05时，本次所制备的EAEC菌体规范物资组内以及组间无清晰性差距，即样品适宜平均性要求。

随机抽取10瓶EAECgDNA规范物资，PCR产物电泳服从呈现，10个gDNA规范物资的astA、aggR、pic基因均患上到清晰的扩增条带（图2）。

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