2.4法兰克福香肠中单核细胞增生李斯特菌以及英诺克李斯特菌的单核检测

在区别浓度英诺克李斯特菌存在的状态下，家养传染法兰克福香肠浸出液经增菌作育后，细胞性单接管平板涂布法均能检测到单核细胞增生李斯特菌。增生珠的制备但随着英诺克李斯特菌传染浓度的李斯链抗普及，单核细胞增生李斯特菌在第一步增菌中的特菌特同体磁终浓度清晰着落。当LM/LI=1∶1000时，评估纵然经FB以及MOPSBLEB作育基二次增菌，单核单核细胞增生李斯特菌的细胞性单终浓度也仅能达到103CFU/mL，其愿望受到清晰的增生珠的制备抑制。

接管IBMSPSSStatistics19统计软件对于区别磁珠捉拿先后取患上的李斯链抗菌落数妨碍配对于Ｔ魔难合成（表5）。家养传染样品经磁珠解决后，特菌特同体磁单核细胞增生李斯特菌与英诺克李斯特菌在显色作育基上的评估菌落数比例存在清晰性差距（P=0.023＜0.05），经scFv-IMBs捉拿后显色平板上的单核单增李斯特菌的菌落数比例清晰普及。经UＶM以及FB作育基作育后，细胞性单scFv-IMBs以及Dyna-IMBs捉拿两种李斯特菌的增生珠的制备菌落数均无统计学差距（P=0.886以及P=0.340），而经MOPS-BLEB作育后，scFv-IMBs的抉择性清晰高于Dyna-IMBs磁珠（P＜0.01）。

以配对于Ｔ魔难比照以及合成区别LM/LI比例分说经3种增菌作育基作育，单核细胞增生李斯特菌以及英诺克李斯特菌的接管状态见表6。对于单核细胞增生李斯特菌的接管妨碍比照，scFv-IMBs与Dyna-IMBs的接管率比照有极清晰性差距（P＜0.01）。分说统计每一种作育基经磁珠解决后的接管率，在UＶM以及FB作育基中scFv-IMBs以及Dyna-IMBs的接管率有极清晰性差距（P＜0.01），但在MOPS-BLEB作育基中两种磁珠之间无清晰性差距（P=0.37＞0.05）。对于英诺克李斯特菌的接管率妨碍比照，scFv-IMBs在每一种作育基中的接管率均清晰低于Dyna-IMBs（P＜0.01），scFv-IMBs呈现出较好的单核细胞增生李斯特菌特同性，可能在搅浑系统中清晰着落英诺克李斯特菌的干扰。

二次增菌作育后经磁珠解决的作育物在显色平板上划线。服从呈现，经scFv-IMBs解决后在FB（LM/LI=1/1000）作育基（LM/LI=1/100以及1/1000）的增菌液中，未能取患上单核细胞增生李斯特菌的单菌落。而经Dyna-IMBs解决后，LM/LI少数组合中FB以及MOPS-BLEB作育基的作育物无奈别离取患上指标微生物的单菌落，甚至无奈检测到单核细胞增生李斯特菌的典型菌落（表7）。scFv-IMBs的高特同性可能较重大的从高浓度英诺克李斯特菌作育系统中别离单核细胞增生李斯特菌。与之相对于的，Dyna-IMBs对于单核细胞增生李斯特菌的特同性低于scFv-IMBs，在显色作育基上引入了更多的布景干扰菌，特意是高浓度的英诺克李斯特菌。在LM/LI=1/1000时，仅能经由灵便度更高的PCR方式检测到指标菌的存在，在抉择性平板上也无奈实用别离指标菌。接管PCR检测可在除了LM/LI=1/100以及1/1000外的试验组合中乐成检测到指标菌，思考到免疫磁珠的捉拿功能在1.0%～20.0%之间，食物样品中少许的英诺克李斯特菌将对于单核细胞增生李斯特菌的检测产生较大的影响。

3品评辩说

平凡状态下，法兰克福香肠中单核细胞增生李斯特菌的别离率可达2%至8%，是极易引起李斯特菌食物中毒的一种即食食物。但因其组成重大、基质干扰大，给单核细胞增生李斯特菌的别离带来很大影响。在人造情景中，单核细胞增生李斯特菌常与此外李斯特菌伴生，并易被拆穿困绕。特意是英诺克李斯特菌的存在清晰影响平板别离的成果，纵然LM/LI比例在1/1的状态下，仍有很大干扰。

在作育历程中，伤害修复功能被觉患上有助于降职指标菌的数目，但第2次增菌光阴超过24h并不未必会清晰降职指标菌数目。经增菌作育后，英诺克李斯特菌的愿望速率平凡会高于单核细胞增生李斯特菌，导致在抉择性琼脂作育基上无奈别离。因此，低浓度的单核细胞增生李斯特菌在食物中易被漏检。借助免疫磁珠捉拿技术可在抉择性平板上更重大地发现指标菌，并取患上单菌落。但因为免疫磁珠中抗体制备难题、非特同性散漫以及低捉拿率导致该方式的运用受到限度。有钻研呈现，Dyna-IMBs在单核细胞增生李斯特菌含量为103CFU/mL的系统中捉拿率缺少10%，对于此外李斯特属细菌也有0.02%～3.42%的非特同性散漫。在本钻研中，scFv-IMBs对于非单核细胞增生李斯特菌的散漫率低于0.5%，具备较好的抉择特同性。

scFv抗体惟独一条轻链以及一条重链，与残缺抗体比照scFv与抗原的散漫力较弱，这可能是导致在增菌作育基中scFv-IMBs捉拿功能略低于Dyna-IMBs的原因。但scFv-IMBs可能在高浓度英诺克李斯特菌存在的食物基质中实用别离单核细胞增生李斯特菌，其检测灵便度可达到1CFU/mL。在抉择性平板上经scFv-IMBs捉拿解决作育物中单核细胞增生李斯特菌的菌落数比例以及别离状态清晰优于Dyna-IMBs。

据报道，UＶM以及FB作育基会着落单核细胞增生李斯特菌外表抗原的表白，而MOPS-BLEB作育基中的BLEB成份可普及单核细胞增生李斯特菌外表抗体的表白。经由在区别作育基中比照免疫磁珠对于指标菌的别离率，也表明MOPSBLEB作育基中磁珠捉拿成果清晰优于UＶM以及FB作育基。因此，选用免疫磁珠捉拿时，应短缺思考增菌作育基对于磁珠捉拿成果的影响。

本钻研制备了一种单核细胞增生李斯特菌特同性的单链抗体片断捉拿磁珠（scFv-IMBs），可从较高浓度布景微生物的法兰克福香肠中，特意是存在英诺克李斯特菌的状态下，实用地富集以及别离单核细胞增生李斯特菌，与市售免疫磁珠产物比照具备更好的别离能耐，可用于实际样品的魔难检测。

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