南极磷虾，乙醇研属节肢动物门甲壳亚门磷虾目磷虾科，浸提极磷又名大磷虾或者南极大磷虾，法提酚物宽泛扩散于南冰洋的取南南极洲海域，是虾多南极生态系统的紧张物种。南极磷虾的资钻蕴藏量极为充实，约在6.5～10亿吨之间，乙醇研且主要生涯在浅层海域，浸提极磷捕捞难度小，法提酚物极具商业开辟后劲南极磷虾具备典型的取南高卵白、低脂肪的虾多特色，包罗8种人体必须氨基酸，资钻矿物资、乙醇研维生素含量充实，浸提极磷而且含有多种活性成份如多酚、法提酚物生物酶、虾青素、甲壳素等，具备宽绰的开辟运用后劲。
多酚类物资的份子结构中含有多个酚羟基基团，其酚羟基可与金属离子发生络合反映，是一类有很高抗氧化活性的人造产物，在化学、生物、食物、药学等多个畛域均有宽泛的运用远景。多酚类物资在人造界的储量十分充实，已经发现动物中有8000余种多酚类化合物及其衍生物。现有文献对于动物多酚的钻研良多，但从动物体内提取多酚类物资的钻研则鲜有报道。本钻研以富裕开辟后劲的陆地生物资源南极磷虾为质料，接管乙醇浸提法提取南极磷虾体内的多酚物资，且经由响应曲面优化判断最佳提取妄想，以期为进一步钻研南极磷虾中多酚物资的成份及功能提供试验根基。

一、资料以及方式

一、资料与试剂

南极磷虾粉，日本水产有限公司。乙醇、丙酮、福林酚试剂、无水碳酸钠、没食子酸等均为合成纯试剂。试验用水为蒸馏水。

二、配置装备部署与仪器

Eppendorfminispan型离神思；恒温水浴振荡器；酶标仪；电子天平。

三、试验方式

（1）样品总酚含量测定

排汇1mL待测样液，退出0.5mL福林酚试剂，短缺震撼后静置3～4min，再分说退出0.5mL10%碳酸钠溶液，定容至10mL，摇匀置于25℃恒温水浴中反映1h，以空缺试剂为比力，765nm条件下测定吸光度。

（2）总酚规范曲线

精确称取0.01g烘干至恒重的没食子酸规范品，消融于蒸馏水中并定容至200mL。患上浓度为0.05mg／mL的规范溶液。

精确量取0.05mg／mL的规范液0、0.二、0.四、0.六、0.八、1.0mL于10mL容量瓶中，退出0.5mL福林酚试剂，短缺震撼后静置3～4min，再分说退出0.5mL10%碳酸钠溶液，蒸馏水定容至10mL，摇匀置于25℃恒温水浴中反映1h，以空缺试剂为比力，765nm条件下测定吸光度，建树规范曲线。

（3）总酚含量与提取患上率合计

按如下公式换算总酚含量（以没食子酸的至关值呈现）:

式中:ω-总酚含量，mg／mL；C-没食子酸品质浓度，mg／mL；V-提取液体积，mL；N-稀释倍数；M-取样量，mL。

按如下公式合计南极磷虾总酚提取患上率：

式中:Y-南极磷虾总酚提取患上率，mg／g；ω-提取总酚含量，mg／mL；V-提取液体积，mL；M'-南极磷虾品质。

（4）南极磷虾多酚提取条件确凿定

①乙醇浓度的抉择试验

分说接管区别体积分数（0%、20%、40%、60%、80%、100%）的乙醇-水提取液，在物料比1:五、提取温度25℃、提取光阴1h条件下，提取南极磷虾中的多酚物资，并合计多酚提取患上率。

②提取光阴抉择试验分说接管差此外

提取光阴（15min、30min、60min、120min、180min、240min），在物料比1:五、以80%乙醇为溶剂、提取温度35℃提取条件下，提取南极磷虾中的多酚物资，并合计多酚提取患上率。

③提取温度抉择试验分说接管差此外

提取温度（15℃、25℃、35℃、45℃、55℃、65℃），在物料比1:五、以80%乙醇为溶剂提取1h条件下，提取南极磷虾中的多酚物资，并合计多酚提取患上率。

④物料比抉择试验

分说以1:三、1:五、1:7.1:九、1:十一、1:13的料液比，在以80%乙醇为溶剂、提取温度35℃、提取光阴60min条件下，提取南极磷虾中的多酚物资，并合计多酚提取患上率。

⑤响应面判断最优提取条件试验接管

Box-Behnken试验妄想道理，以乙醇浓度、提取光阴、提取温度及物料比4个因素为自变量，多酚提取率为响应值，妄想四因素三水平试验（表1）。对于试验数据妨碍多项式回归合成，建树二次响应面合成模子，拟合患上到二次回归方程。妨碍27组响应面优化试验，每一个试验组重复3次，求取平均值，以判断最佳提取条件。

二、服从与品评辩说

一、单因素试验

（1）乙醇浓度的抉择

区别乙醇浓度对于多酚提取患上率的影响见图1。图1表明，提取溶剂乙醇体积分数为80%时多酚提取患上率最高，体积分数为40%时多酚提取患上率最低。其原因可能是南极磷虾体内的动物规范多酚与磷虾油键散漫构整人造活性多效力复合份子，溶剂水不能使多酚与其余物资衔接的氢键断裂，退出乙醇可能破损氢键，乙醇含量达到未必浓度后，随着乙醇浓度的增高，减速氢键断裂使良多酚患上率普及；但乙醇浓度过高会使良多酚与溶剂的极性差距变大，多酚消融度着落，导致多酚提取患上率着落。依据试验服从，本文选用80%的乙醇-水溶液作为提取溶剂。
 

（2）提取光阴的抉择

提取光阴对于提取成果的影响如图2所示。图2表明，60min内随着提取光阴的削减，南极磷虾多酚患上率清晰削减；60min后患上率逐步着落。其原因可能是在60min之内，细胞内多酚快捷散漫到溶剂中，患上率削减。随着提取光阴的进一步削减，全副多酚被氧化分解，造成患上率着落。因此，事实的提取光阴为60min，此时多酚提取率最高。

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