指标

建树铁甲草中大黄素以及齐墩果酸的铁甲含量测定方式。

方式

接管HPC法测定铁甲草中齐墩果酸的草中含量。WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6妹妹×250妹妹，齐墩5μm），果酸行动相为甲醇-PBS（85∶15），含定流速1.0mL/min，量测柱温35℃，铁甲进样量为10μL，草中检测波长210nm，齐墩测定齐墩果酸的果酸含量。服从：齐墩果酸在5～50μg/mL的含定浓度范内呈优异线性关连（Y=4533X+909.6，R=0.9996），量测平均接管率为99.39%，铁甲RSD为1.53%（n=6）。草中

论断

本试验方式精确灵便、齐墩晃动坚贞，可用于铁甲草中齐墩果酸的含量测定。

铁甲草（CassiamimosoidesLinn.）为豆科（Leguminousae）决明属一年或者多年生亚灌木状木本动物，以全草入药，主要扩散于广东、福建、云南、台湾、贵州以及广西等地，其味甘、性平，具备清肝明目、散瘀化积的成果。有钻研服从表明，铁甲草可能实用抑制脂肪酶，防御脂肪肝；其主要化学成份有大黄素、齐墩果酸、β-谷甾醇、木犀草素、槲皮素等。可是，当初国内外对于铁甲草的钻研主要会集在化学成份以及药理浸染方面，无关铁甲草药材品质操作的钻研很少，且未见对于其实用成份妨碍含量测定的报道。本试验以铁甲草中具备抗炎保肝的实用成份齐墩果酸，作为定量检测指标成份，建树铁甲草中齐墩果酸的HPLC含量测定方式，为铁甲草的品质操作以及公平开辟提供参考依据。

1仪器与资料

WatersAlliance2695型功能液相色谱仪；WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6妹妹×250妹妹，5μm）；WJX-A1000型高速多功能破碎捣毁机；JP-100S型超声波洗涤器；MING-CHE24UV超纯水机。

齐墩果酸比力品（C1723001）；铁甲草采于广东省梅州市蕉岭县，经嘉应学院医学院生药学翟明教师判断为豆科决明属动物铁甲草（Cassiamimosoides）的全草；其余试剂均为合成纯。

2方式及服从

2.1比力品溶液的制备

详尽称取齐墩果酸比力品1mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，即患上。

2.2供试品溶液的制备

称取铁甲草粗粉2g，退出2moL/L的盐酸10mL，短缺浸润后，在60℃水浴下，酸水解2h，滤渣用超纯水水洗至中性，去世板后退出10倍量的90%的乙醇溶液以及0.5%NaOH溶液，调节pH值至8，50℃超声30min，抽滤后，水浴加热稀释成浸膏。

浸膏用甲醇超声消融后，离心取上清液，定容至10mL，即患上。

2.3色谱条件

色谱柱：WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6妹妹×250妹妹，5μm）；行动相：甲醇：PBS=85∶15；检测波长：210nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL，柱温：35℃。

2.4线性关连审核

分说详尽排汇“2.1”项下的齐墩果酸比力品0.五、一、二、三、四、5mL溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容，患上浓度为五、十、20、30、40、50μg/mL系列浓度的齐墩果酸比力品溶液，于“2.3”项下的色谱条件，以齐墩果酸比力品溶液色谱峰面积Y为纵坐标，齐墩果酸比力品浓度X（μg/mL）为横坐标，妨碍线性拟合，患上齐墩果酸规范曲线，求患上回归方程Y=4533X+909.6，R=0.9996。服从表明，在5～50μg/mL的浓度畛域内，齐墩果酸比力品溶液的峰面积与浓度的线性关连优异。

2.5专属性审核

取名目“2.1”以及“2.2”项所制备的比力品溶液以及供试品溶液，在“2.3”的色谱条件下进样，齐墩果酸的保存光阴约为13.77min，峰型晃动，别离度优异，有较好的基线别离，未见杂质峰干扰，具备优异的专属性。如图1所示。

2.6仪器详尽度试验

详尽排汇比力品溶液1.0mL，于“2.3”项的色谱条件下，陆续重复进样6次，每一次10μL，检测患上到大黄素峰面积的RSD为1.36%，表明仪器详尽度优异。

2.7晃动性试验

详尽排汇供试品溶液1.0mL，分说于0、二、四、六、八、12h于“2.3”项色谱条件下进样，检测患上到齐墩果酸的峰面积的RSD为0.82%。表明供试品溶液在12h内晃动。

2.8重复性试验

详尽称取6份等品质铁甲草粗粉2.00g，按“2.2”项下的方式平行制备6份供试品溶液，于“2.3”项的色谱条件，检测患上到齐墩果酸峰面积的RSD为1.47%。表明该方式重复性优异。

2.9加样接管率试验

详尽称取已经知含量的等品质铁甲草粗粉6份，每一份2.00g，分说详尽退出对于立浓度的齐墩果酸比力品，按上述“2.2”的提取方式平行制备成供试品溶液，于“2.3”项色谱条件下测定，合计患上到平均接管率服从为99.39%，RSD为1.53%。表明该方式测患上的服从有优异精确性。服从见表1。

2.10样品含量测定

详尽称取3份区别批药材各2.00g，遵照“2.2”项的制备方式制备成供试品溶液，每一份样品分说在“2.3”项的色谱条件下进样三次，记实峰面积，合计样品中齐墩果酸的含量。服从见表2。

3品评辩说

在审核齐墩果酸的色谱条件时，曾经接管甲醇水，甲醇-0.1%甲酸以及甲醇-PBS作为行动相，审核服从呈现，当行动相抉择为甲醇-PBS（85∶15）时，样品中齐墩果酸别离度更好，峰型晃动，无杂峰干扰。因为齐墩果酸同时含有羟基以及羧基基团，在碱性条件下更易被提取，在提取条件的审核历程中，发现退出过多碱溶液使其pH值至8时，更利于齐墩果酸成份的提取。

本试验建树运勤勉用液相色谱法测定铁甲草中齐墩果酸含量的方式，方式详尽度高、晃动性、重复性、加样接管率均适宜方式学验证的要求。测患上3批样品中，齐墩果酸的含量在3.67%～3.73%之间，含量较高，且齐墩果酸在临床上主要用于护肝降酶，与铁甲草的成果适宜，诠释齐墩果酸适应作为铁甲草的品质检测指标成份，该方式可作为铁甲草品质操作的方式，从而为铁甲草品质规范的拟订提供参考依据。

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