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功能液相色谱法(HPLC)

发表于 2024-10-16 22:14:09 来源:饕餮之徒网

也称低压液相色谱法(High pressure liquid chromatography)或者高速液相色谱法(Highspccd liquid Chromatography)。液相它因此液体作为行动相的色谱一种色谱法。可用以别离检测极性强、液相份子量大及离子型有机物,色谱特意是液相对于不易气化或者受热易分解的农药残留检陇更能呈现出优异性。近些年来,色谱接管功能牢靠相、液相低压泵、色谱高灵便度的液相检测器、柱前(后)衍生化技术以及合计机联用等,色谱大大普及了液相色谱的液相检测功能、灵便度以及操作被动化水平,色谱现已经成为检测情景中微量有机传染物的液相紧张方式。此法也有如下缺少:①溶剂(行动相)斲丧量大,色谱且良多溶剂对于人体有害,液相②检测器种类较气相色谱少,且灵便度也低,⑧液相色谱柱价格高尚。

HPLC分液-液调配色谱、液-固的吸附色谱、离子替换色谱以及凝胶色谱等多少大类。

一、色谱柱

色谱柱是液相色谱起别离浸染的紧张部件,由柱管以及填充料组成。往管为内径平均、管壁抛光的不锈钢管,罕用的规范柱型为内径3.9妹妹或者4.6妹妹,长15cm~25cm的不锈钢柱。当初,长度为3cm~5cm,填料3μm~5μm的短柱具备功能、省时,节约溶剂的短处,运用畛域有增大的趋势。

(1)填充剂

填充剂有薄壳型微球(30μm~45μm),深孔大顾粒全多孔TJ (20μm~40μm〕以及歉粒很少的短孔全多孔型((3μm~10μm)三种。应依据待测物的理化性子来选定所需运用差此外牢靠相。罕用的吸附色谱所用的牢靠相有:硅胶、氧化铝、氧化镁、份子筛(极性)以及活性炭(非极性)。用于调配色谱的牢靠相有:正十八烷(ODS)、异三十烷(SQ)、聚乙二醇(PEG),β,β'-氧二丙晴(ODPN),聚酞胺等键合牢靠相。用于离子替换色谱的牢靠相有离子替换剂,用于凝胶色谱的牢靠相有凝胶等。

在牢靠相判断后,为使待测物各组分说离,还需选用适量的行动相。

(2)行动相

行动相也称洗脱液或者载液。它除了象气相色谱仪中载气那样照料样品中各组分挪移外,更紧张的是还起到消融待测物并使其各组分说离的浸染。行动相可分为极性以及非极性二大类。当行动相极性比牢靠相极性大时,称反相液相色谱:反之,称正相色谱。

用作行动相的溶剂应具备如下条件:①具备晃动的化学性子,不能以及牢靠相发生化学反映,也不能引起牢靠相外表活性基团的消散以及基质的溶胀;②纯度高或者易于纯化。③沸点不宜过低,④无毒或者低毒,⑤溶剂功能应与所运用检测器相立室(不患上有干扰);⑥对于样品各组分既要有优异的消融性,又要有适量的极性,从而使各组分达到短缺地别离;⑦粘度要低,否则行动碰壁。

二、检测器

液相色谱的检测器能陆续将随载液流出的各待测组分的量随光阴变换悄况转化为电信号输人记实仪或者电脑以遏制定量、定性合成。现寻罕用于有机传染物检测合成的检测器主若是紫外罗致检测器,其次为萤光检测器。事实的检测器应具备如下短处:①灵便度高、重复性好。②噪声音应低;③线性畛域宽;④对于溶剂、行动相流速或者情景很度的变换不锐敏,⑤晃动性好,操作不便。

(1)紫外罗致检测器〔UV)

UV是当初运用最为宽泛的检定器,具备较高的灵便度、检测限较低(最低检出浓度可达5×10-4mg·L-1)、线性畛域宽((5×104mg·L-1、行动相以及温度的变换对于基线影响不大、晃动性好及不破损待测物等短处。不外UV只可检测对于紫外光有罗致的有机物。

UV可分为牢靠波长检测器以及可变波长检测器两种。牢靠波长检测器个别运用低(254nm)以及中压(280 nm)汞灯光源。波长为254 nm的检测器,因光派强度很大,噪音幅度很低,故灵便度很高。可调式检测器波长畛域为200 nm~400nm,常选用氮灯或者旅灯为光源。尚有的以钨灯为光源,可检测波长畛域为400 nm~600nm。

(2)荧光检侧器(FD)

FD为一种灵便度高、抉择性强的检测器,虽不如紫外检测器运用那样宽泛。但它具备比UV灵便度高1个~2个数目级的短处,故也是罕用的检测器。在紫外光映射下,具备对于称共扼系统的份子(如多环芳烃类化合物)发射荧光,可用荧光检测器测定。一些含卤素、重金属、氧、硝基的化合物,易使荧光焚烧,用FD时应给以留意。

参考资料:土壤农业化学合成方式

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