2.4菌株L2-003-A-5的抑制烟草判断

2.4.1菌株L2-003-A-5的形态特色

菌株L2-003-A-5在扫描电镜下的形态如图2所示，菌株的青枯气生菌丝清晰呈卷曲螺旋状；胞子呈短圆柱形，胞子的株放外表滑腻；菌丝愿望能耐发达、分支清晰，线菌可见散落的筛选胞子扩散。菌株L2-003-A-5在高氏一号琼脂中愿望迅速(图3)，及判其气生菌丝呈红色，抑制烟草基内菌丝呈淡黄色，青枯不产生可溶性色素。株放将菌株L2-003-A-5在8种作育基中作育以及审核，线菌服从呈现，筛选气生菌丝以及基内菌丝以红色偏淡黄为主，及判无可溶性色素产出，抑制烟草在酵母膏-麦芽膏琼脂、青枯马铃薯浸汁琼脂、株放营养琼脂等3种作育基上的长势较差(表2)。

2.4.2菌株L2-003-A-5的心理生化特色

菌株L2-003-A-5愿望的pH畛域是6～9，最适pH为7；对于NaCl耐受能耐较差，只能在含1%NaCl的作育基中愿望，且长势较差；愿望温度为25～40℃，最适温度为30℃；淀粉水解、纤维素水解、油脂水解、甲基红、牛奶凝聚以及过氧化氢酶反映呈阴性，明胶液化反映、产H2S、柠檬酸盐反映、硝酸盐复原以及苯丙氨酸脱氢酶反映呈阴性。

2.4.3菌株L2-003-A-516SrRNA基因全副序列合成

测序服从呈现，菌株L2-003-A-5的16SrRNA基因全副序列长度为1493bp，在GenBank核酸登录号为KT119348。依据系统发育合成，菌株L2-003-A-5属于链霉菌属细菌，与典型菌株Streptomy-cessomaliensisNBRC12916T、Streptomycesalbidofla-vusDSM40455T、氢化链霉菌(Streptomyceshydroge-nans)NBRC13475T、浅紫链霉菌(Streptomycesviola-scens)ISP5183T、StreptomycesdaghestanicusNRRLB-5418T以及StreptomyceskoyangensisVK-A60T聚为一簇，与这些菌株的16SrRNA基因相似性均为99.9%；与典型菌株StreptomycesdaghestanicusNRRLB-5418T以及StreptomyceskoyangensisVK-A60T的16SrRNA基因相似性分说为99.7%以及99.4%。经由毗邻法构建的基于菌株L2-003-A-5及相干菌株16SrDNA序列的系统发育树如图5所示。综合合成与菌株L2-003-A-5相似性最近的菌株的形态特色、心理生化特色以及16SrRNA基因序列比对于(Rongetal,2009；魏玉珍等,2010；秦盛等,2009；谭力等,2015；王毓舒,2011；Kye,Yong,1993)，分说L2-003-A-5为一株微白黄链霉菌(Streptomycesalbidoflavus)。

2.5菌株SC-168-A-2的判断

2.5.1菌株SC-168-A-2的形态特色

菌株SC-168-A-2在扫描电镜下的形态如图2所示，菌株的气生菌丝呈长直胞子链状；胞子呈短圆柱形，周围呈内陷形态；菌丝愿望能耐发达、分支清晰。在供试的8种作育基中，SC-168-A-2的气生菌丝以红色为主，基内菌丝以淡黄或者红色为主；在营养琼脂作育基上愿望状态较差(表2)，在包罗高氏一号作育基(图3)在内的作育基中均不产生可溶性色素。

2.5.2菌株SC-168-A-2的心理生化检测

适于菌株SC-168-A-2愿望的pH畛域是6～9，最适pH为7以及8；菌株SC-168-A-2能耐受8%Na‐Cl；愿望温度畛域为15～45℃，最适温度为30℃；淀粉水解、纤维素水解、油脂水解、牛奶凝聚、产H2S反映、过氧化氢酶反映以及甲基红反映呈阴性，明胶液化、硝酸盐复原以及苯丙氨酸脱氢酶反映呈阴性。

2.5.3菌株SC-168-A-216SrRNA基因全副序列合成

菌株SC-168-A-2的16SrRNA基因全副序列长度为1436bp，在GenBank核酸登录号为KR140205。依据系统发育合成，菌株SC-168-A-2属于链霉菌属，与典型菌株Streptomycespraten-sisch24T系统发育关连最近，16SrRNA基因相似性为99.8%；与此外3个典型菌株Streptomycesgriseopla-nusAS4.1868T、StreptomycescyaneofuscatusJCM4364T以及StreptomycesanulatusNRRLB-2000T的16SrRNA基因相似性分说为99.1%、98.5%以及98.3%。综合合成形态特色、心理生化特色以及16SrRNA基因全副序列(杨桂柳等,2015；Kimetal,2012)，判断菌株SC-168-A-2属于链霉菌属的Streptomycespratensis。经由毗邻法构建的基于菌株SC-168-A-2及相干菌株16SrDNA序列的系统发育树如图6所示。

3品评辩说

本钻研筛选了3株对于烟草青枯病原菌拮抗成果优异的放线菌，经判断均为链霉菌，而当初已经见报道的拮抗烟草青枯病原菌的放线菌种类绝大少数也是链霉菌，本钻研服从验证了链霉菌在这方面的优异成果。已经报道的能拮抗烟草青枯病原菌的链霉菌种类主要包罗薰衣草链霉菌(S.lavendulae)(张薇,2009)、橄榄绿链霉菌(S.olivaceoviridis)、粉红孢类群玫瑰暗黄链霉菌(S.roseofulvus)(陆铮铮,蒋选利,2015)、娄彻氏链霉菌(S.rochei)(王岩,2009)等，本钻研服从充实了链霉菌拮抗烟草青枯病原菌的种类。此外，已经有的钻研表明，可用于农业生物防治的放线菌中60%是链霉菌(Tanaka,Omura,1993)，这可能是因为链霉菌是革兰氏阴性细菌放线菌科中最大的属，种类繁多，在种种生涯情景中扩散宽泛，更紧张的是链霉菌可能产生少许种类充实的活性次生代谢产物(Kimetal.,2003；Parketal.,2008；Wangetal.,2007)，这些代谢产物具备多样的功能，可宽泛运用于农业生物防治畛域。本钻研筛选所患上的链霉菌种类也有在农业生物畛域的报道，如S.microflavus具备增长植株愿望(张琪等,2018；郭建军等,2013)、产生抗菌活性(王磊,2011；黄灿等,2007)等特色，S.albidoflavus也有抗菌能耐(张雯龙等,2012；周丽娜等,2015；戚珊珊,2011；于素亚等,2012)，但这些微生物在拮抗烟草青枯病原菌的特色方面鲜有报道。此外，当初报道的少数烟草病原菌的拮抗微生物不止对于一种病原菌具备抑制作用(易有金,2007；展丽然等,2008；王娜娜,2012)，而此特色是拓宽拮抗微生物运用畛域的紧张根基。本钻研所筛选取患上的拮抗放线菌对于赤星病菌及辣椒、番茄、马铃薯等茄科类动物青枯病菌均有抑制作用，抑菌畛域广，揭示各拮抗菌株具备用于研制生物有机肥的后劲，具备进一步开辟钻研的价格。

4论断

本钻研从四川2个烟草种植区的根际土中别离筛选取患上3株拮抗烟草青枯病原菌的放线菌；对于抑菌谱的测定发现，该3株菌不光对于烟草青枯病原菌具备较好的拮抗成果，对于烟草赤星病及辣椒、番茄、马铃薯青枯病的病原菌均有抑制成果。散漫表型特色、心理生化特色以及遗传特色合成，判断3株放线菌均为链霉菌，分说属于Streptomycesmicroflavus、Streptomycesalbidoflavus以及Streptomycespratensi。

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