指标：建树HPLC法同时测定引阳索中五味子醇甲、法同五味子乙素的时测素含量。方式：接管AgilentExtendC18(250妹妹×4.6妹妹，定引5μm)色谱柱；以甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液为行动相，阳索流速为1.1mL·min^-1；梯度洗脱；进样量为10μL；检测波长为250nm；柱温为32℃。中味服从：五味子醇甲、醇甲五味子乙素的味乙线性畛域分说为7.013～175.3mg·L^-1(r=0.9998，n=7)以及7.040-176.0mg·L^-1(r=0.9998，含量n=7)；提取接管率：五味子醇甲96.05%(RSD=0.7%，法同n=6)，时测素五味子乙素96.48%(RSD=0.9%，定引n=6)。阳索论断：本法操作专属性强、中味快捷、醇甲啰嗦、味乙服从精确，可用于引阳索的品质操作。
引阳索收载于《中华国夷易近共以及国卫生部药品规范》中药成方制剂第三册，由淫羊藿浸膏与五味子浸膏按2∶1搅浑制成颗粒剂，具备补肾壮阳，生津功能，用于阳痿早泄，腰膝酸软，津亏自汗，头晕眼花等症。现行规范中贫乏对于处方中五味子浸膏品质操作的方式，谭文化以及孟淑智先后报道了引阳索中五味子浸膏指标成份五味子甲素以及五味子醇甲的TLC分说方式，当初尚未有引阳索中五味子浸膏指标成份五味子醇甲以及五味子乙素含量测定的报道，本文建树了同时测定引阳索中五味子醇甲以及五味子乙素的含量方式，本钻研专属性强，可用于引阳索中五味子浸膏的品质操作。

1仪器

Waters2695功能液相色谱仪(包罗使命站、被动进样、柱温箱、2998型二极管阵列检测器美国Waters公司)，XPE205电子天平(METTLERTOLEDO公司)，超声波洗涤机(HT300功率：40KHZ济宁恒通超声电子配置装备部署)，超纯水机(Milli-QAdvantageA10默克密理博公司)。

2资料

五味子醇甲比力品(批号110857-201010含量99.4%)、五味子甲素比力品(批号110764-201010含量99.6%)、五味子乙素比力品(批号110765-200710)均购自中国药品生物废品检定所，引阳索药品3批(批号：20170704，20180604，20191103，市售)，淫羊藿(批号：1910001，安国市聚药堂药业有限公司)，超纯水(自制)，其余试剂(色谱纯，市售)。

3方式以及服从

3.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：AgilentExtendC18柱(250妹妹×4.6妹妹，5μm)；行动相：甲醇(A)-乙腈(B)-0.1%磷酸溶液(C)，梯度洗脱：0～24min为35%～55%A，30%～30%B；24～27min为55%～35%A，30%～30%B；27～30min为35%～35%A，30%～30%B；检测波长：250nm；流速：1.1mL·min^-1；进样量：10μL；柱温：32℃。五味子醇甲、五味子乙素与相邻色谱峰的别离度均大于1.5，事实板数均不低于5000。

3.2溶液的制备

3.2.1比力蕴藏液

取P2O5去世板13h的五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素比力品，分说详尽称取14.11mg、16.62mg、14.08mg置20mL量瓶中，加甲醇过多，超声使消融，用甲醇稀释至刻度，作为比力品蕴藏液(五味子醇甲701.3mg·L^-1，五味子甲素827.7mg·L^-1，五味子乙素704.0mg·L^-1)。分说详尽量取1mL，置对于立10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，患上搅浑比力品溶液。

3.2.2供试品溶液

取供试品5袋，详尽称重，研细，详尽称取5g(至关于1袋)，置100mL具塞锥形瓶中，加体积分数75%甲醇溶液50mL，密塞，称重，超声提取30min；部署至室温，称定重量，用上述甲醇溶液补足减失重量，用0.45μm微孔滤膜过滤，备用。

3.2.3阴性比力溶液
按引阳索处方，不加五味子浸膏，按“3.2.2”条方式制备阴性比力溶液。按“3.1”条色谱条件进样，记实色谱图见图1。

3.3线性关连审核

挨次详尽量取五味子醇甲、五味子乙素比力品蕴藏液各0.一、0.二、0.五、1.0、1.五、2.0、2.5mL，分说置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，患上区别浓度系列搅浑比力溶液。按“3.1”条色谱条件，进样10μL，以峰面积(Y)对于品质浓度X(mg·L^-1)妨碍回归合成，患上：五味子醇甲回归方程Y=2.062×104X-7.829×104(r=0.9998，n=7)，在7.013～175.3mg·L-1内，五味子醇甲线性优异；五味子乙素回归方程Y=1.543×104X-6.039×104(r=0.9998，n=7)，在7.040～176.0mg·L-1内，五味子乙素线性优异。

3.4详尽度试验

取五味子醇甲、五味子乙素搅浑比力品蕴藏液，用0.45μm微孔滤膜滤过，按“3.1”条色谱条件，陆续进样5次，每一次10μL，测患上五味子醇甲峰面积分说为1386130、1413230、141660一、140990三、1398858，RSD为0.9%(n=5)；五味子乙素峰面积分说为103973五、106823一、106434八、105937六、1053065，RSD为1.1%(n=5)，服从表明仪器有优异的详尽度。

3.5晃动性试验

取引阳索颗粒过多，按“3.2.2”条方式制备供试溶液，挨次在0、二、六、十、1八、2四、48h，重复进样，每一次10μL，测患上五味子醇甲峰面积分说为143903二、142803五、141936六、141836七、142103五、141653四、1403982，RSD为0.8%(n=7)；五味子乙素峰面积分说为50576二、50492七、50635四、49875六、49276九、50326二、491965，RSD为1.2%(n=7)，服从表明样品在48h内晃动。

3.6重复性试验

分说详尽称取对于立批引阳索(批号20180604)5份，按“3.2.2”条方式制备供试溶液，丈量五味子醇甲含量分说为3.6三、3.6八、3.6七、3.6九、3.64mg/袋，RSD为0.7%(n=5)，五味子乙素含量分说为1.8二、1.8一、1.7九、1.8三、1.84mg/袋，RSD为1.0%(n=5)，服从表明方式重复性优异。

3.7接管率试验

分说详尽称取已经知含量的引阳索(批号20180604)约2.5g，6份，分说置100mL锥形瓶中，分说详尽退出比力溶液：五味子醇甲比力溶液(0.9165mg·mL^-1)、五味子乙素(0.9118mg·mL^-1)、各2.0、1.0mL，按“3.2.2”条方式制备供试溶液，进样10μL，服从测患上五味子醇甲、五味子乙素平均接管率分说为96.05%(RSD=0.7%，n=6)、96.48%(RSD=0.9%，n=6)，服从见表1。

3.8样品含量测定
取引阳索10袋，按“3.2.2”条方式制备供试溶液，平行3份。按“3.2.1”条方式制备比力品溶液，按“3.1”条色谱条件，进样10μL，用外标法测定3批引阳索样品中五味子醇甲以及五味子乙素的含量，服从见表2。

4品评辩说

4.1测定波长的抉择

宣东平等报道了五味子醇甲以及五味子乙素同时检测的波长为254nm，《中国药典》2015版五味子含量测定项下测定五味子醇甲的波长为250nm，综合思考被测物资最大罗致波长、罗致强度，最终选定250nm作为检测波长。

4.2行动相的抉择

行动比照拟了甲醇-0.1%磷酸溶液(35：65)、乙腈-0.1%磷酸溶液(30：70)，发现被测成份可能达到基线别离，但五味子乙素保存光阴超过60min，与杨高昂等钻研服从相同，最终抉择甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液三元系统为行动相，梯度洗脱，行动相经由引入乙腈延迟被测物资保存光阴，线性调整甲醇以及0.1%磷酸溶液比例使3种木脂素与其余物资实用别离，服从样品中五味子醇甲、五味子甲素以及五味子乙素别离成果好，无杂质干扰，且出峰快，保存光阴分说为五味子醇甲5.18min、五味子甲素16.88min、五味子乙素20.35min。

4.3含量测定指标抉择

任伟光等报道了五味子醇甲、甲素、乙素是五味子中紧张木脂素类化合物，有呵护肝脏、中枢抑制、降糖、抗炎等药理浸染。马莹慧等报道了五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素为指标的含量合成方式，李宝等报道了五味子浸膏中五味子醇甲、甲素、乙素的含量测定方式，本钻研发现引阳索样品色谱图中五味子甲素色谱峰峰面积较小，因此本文仅抉择了五味子醇甲以及五味子乙素2个指标妨碍含量测定。五味子甲素色谱峰可作为特色峰之一，用于引阳索中五味子浸膏的定性分说。

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