2.4细菌16SrRNA份子判断

16S rRNA PCR产物电泳服从(图4)表明,罗氏离判从细菌 菌株的DNA模板中扩增出巨细约为1400 bp左右的片 段,适宜预期服从,序列号为MN736843,将基因序列经由NCBI妨碍同源比对于合成,服从呈现与该序列同 源性比最高的菌株均是豚鼠气单胞菌，将序列与已经知 序列构建系统发育树(图5),沼虾可能看出,该菌株与豚鼠气单胞菌(A. caviae)聚为一个分支,散漫生化试验以及革 兰氏染色等服从,可判断该别离菌株为豚鼠气单胞菌。

2.5家养熏染

经由家养熏染的罗氏沼虾泛起与人造水域患病虾 相似的症状,熏染罗氏沼虾泛起鳃丝红肿,鳃丝外表出 现黑斑等症状(图6),熏染组在7天内全副诞生，而对于 照组不泛起颇为。气单从家养熏染濒临诞生的胞菌罗氏沼虾 肝胰腺机关内再次妨碍细菌别离纯化，将别离菌株再 次妨碍心理生化试验以及份子学判断等,别断患上到与原分 离菌株相同的试验服从,证实该别离菌株为罗氏沼虾致病菌-豚鼠气单胞菌(A.caviae).

3品评辩说

豚鼠气单胞菌(A.caviae)隶属于气单胞菌科.气单 胞菌属，是罗氏离判劫持中国水产养殖动物瘦弱的主要致病菌之一,可能导致日本鰻鲡(Anguillajaponica).胡子鲶(Clarias fuscus).中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis). 中国 对于虾(Penaeus chinensis). 南方鲇(Silurus meriordinalis Chen)、中华鳖(Triongxsinensis)等多种水产动物熏染。沼虾本次钻研从患病的豚鼠罗氏沼虾体内别离出致病 菌，井将患上到的气单劣势菌株经由细菌形态审核.革兰氏染 色、溶血试验以及心理生化合成可开始分说该别离菌 株为豚鼠气单胞菌(A. caniae).其16S rRNA基因序列 构建进化树,胞菌服从呈现该别离菌株与豚鼠气单胞菌聚 为一族,综合一着实施服从可判断该别离菌株为豚鼠 气单胞菌。运用该别离菌株对于瘦弱罗氏沼虾妨碍家养 熏染.熏染后的别断罗氏沼虾呈现出与人造水城条件下患 病虾相似的症状,并对于熏染后的罗氏沼虾再次妨碍细 菌分高纯化.患上到与豚鼠气单胞菌相似的菌株,进逐个步: 证明了该细菌在罗氏沼虾体内的致病性,同时也对于豚 鼠气单胞菌的病原钻研资料妨碍了未必的填补。

对于别离菌株的心理生化特色妨碍判断,该病原菌 对于氧化酶、阿拉伯糖、沼虾葡萄糖产酸、豚鼠卵白胨水.精氨酸水 解酶、明胶.苯丙氨酸为阴性:硫化氢.丙二酸盐.赖氨 酸脱发酶。鸟氨酸脱羧酶。枸缘酸盐.V-P .葡萄糖酸盐 为阴性,豚鼠气单胞菌的心理生化特色存在菌株差距 性，本钻研分高的豚鼠气单胞菌对于枸橼酸盐以及卵白胨 水的判断服从与模式气单胞菌相同,泛起上述差距的 原因可能是因为养殖情景、天气条件.天文位置.寄主 体区别造成的。当初.,在水产动物中宽泛运用抗菌药 物对于疾病妨碍防治，本次钻研的药敏试验服从表明,该 别离菌株对于头孢曲松.氣霉素、氟苯尼考四环素、多西 环素s种药物高度锐敏,对于卡那霉素1种药物中度敏 感.对于环丙沙星。诺氟沙星、红霉素.阿奇霉素新生霉 素.链霉素.复方新诺明以及利福平8种药物耐药。本次 钻研服从与已经报道的其余种类分逾越的脉鼠气单胞菌 的药物锐敏性存在一-定差距1,这表明豚鼠气单胞菌 对于药物锐敏性存在一-定的差距,这可能以及差此外区域。 区别养殖情景中药物种类以及药物运用水平区别有对于细菌的判断方式有良多,比喻环介导等温扩 增技术.单克隆抗体以及间接ELISA法等.16SrRNA在 细菌染色体的基因组中宽泛存在,含高度激进区城且 份子巨细始终。基于I6SrRNA基因序列合成具备简 易、功能等短处，曾经成为细菌判断以及亲缘关连分说 的逐个种实用的工具,可是因为I6SrRNA可能存在逐个些 不清晰的位点且基因数目有限,以是给序列的合成带 来不便，本次钻研对于别离细菌的16SrRNA基因及其系 统进化树妨碍合成,并与心理生化特色以及革兰氏染色 等方式相散漫,进而分说该别离菌株为脉鼠气单胞菌， 普及了细菌判断服从的精确性以及可信度。

当初，已经判断的气单胞菌属主要别离自人以及区别 的动物寄主:从患病水活泼物以及人熏染的伤口中别离-有的还能在食物中别离纯化患上到PPABLOS等 从腹泻病患.饮水以及食物别离的气单型菌妨碍判断﹐ 服从表明,人源气单胞菌以及饮水源气单型菌较为挨近， 诠释气单型菌可能经由水源转达到人类,从而导致人 癸产生疾病P樊海平等*从发生败血症的中国对于虾 别离纯化出豚鼠气单胞菌以及嗜水气单胞菌,可是对于 从罗氏沼虾中别离到豚鼠气单胞菌以及以豚鼠气单胞 菌熏染为主的罗氏沼虾疾病的报道较少,罗氏沼虾豚 鼠气单胞菌是否可能导致人以及其余水活泼物发病﹐它 以及人源气单胞菌有无亲缘关连,以及其致病机理均有 特进一步钻研。因此,前期还需要进一步妨碍该病璧 菌的盛行病学审核，清晰其发病的纪律,并确认其危害 的工具以及钻研其致胸机理等,将更有利于对于该致病 菌引起的罗氏沼虾疾病妨碍实用的防控,增长罗氏沼 虾工业的瘦弱发展-

抗生素等药物是连结水产养殖业动物瘦弱斲丧以 及病 例治的紧张蹊径。可是因为日后水产市场抗生 素种类太多,以及用药习性不相同，导政渔药运用相对于 凌乱,细菌的耐药征兆也越来越严正,以是在水产动物 中坚持生素药物的抉择以及运用未必要有迷信性,对于病 瓯菌揉运用抗生素等药物治疗,必须参考其药敏试验 服从,严酷凭证水产药物运用的相干规定﹐同时还要注 愈穿梭用药以及药物运用浓度.尽量即便防御药物的残留， 本次钻研为罗氏沼虾豚鼠气单厩菌判断以及病害劭治 提供未必的参考以及事实根基-

4论断

本钻研从患病的罗氏沼虾中别离出一糅致病菌- 豚鼠气单胞菌,并经由对于其菌落形态特色.心理生化鉴 定并散漫16SrRNA序列合成,可分说该致病菌为豚鼠 气单慰菌.家养熏染试验证明了该致病菌对于罗氏沼虾 具备较强的致病性.药敏试验服从表明该致病菌对于头 泡曲松.氯霉素.氟苯尼考.四环素.多西环素5种药物 高度锐敏,而对于环丙沙星.诺氟沙星.红霉素.阿奇霉 素.新生霉素链霉素.复方新诺明以及利福平8种药物 耐药,因此可参考药敏试验服从对于罗氏沼虾豚鼠气单 巍菌运用适量的药物妨碍治疗﹐以达到最佳治疗效 果-水钻研所选的环丙沙星以及氯霉素仅用来钻研菌棵 的抗药性，并不能用于斲丧,面氟苯尼考可能作为罗氏 沼虾豚鼠气单脱菌的主要治疗药物。这也握醒养殖户 以及钻研斲丧职员在罗氏沼虾养殖历程中,要在国家觉 许药物运用畛域之内,选取最佳眩感药物用来妨碍病 害防治,普及用药的针对于性，做到公平端庄用药,尽量即便 削减药物残留.o研笼为进一步品评辩说罗氏沼虾豚鼠气 单胞菌的判断以及防治提供未必的参考.

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