枸杞（wolfberry，褐变黑枸RW）为茄科枸杞属动物，杞抗是氧化研我国传统贵重中药，自古以来不断把它作为滋补下品，浸染主要含有枸杞多糖，褐变黑枸胡萝卜素等多种活性成份。杞抗《本草大纲》中记实枸杞“久服坚筋骨，氧化研轻身不老，浸染耐寒暑”。褐变黑枸枸杞性甘味平，杞抗今世医学钻研表明，氧化研枸杞具备滋补肝肾、浸染益精明目、褐变黑枸延缓朽迈等泛滥成果。杞抗

朽迈是氧化研一种由多种因素引起的怪异而又重大的心理征兆，个别随同着心理功能的进化甚至衰竭，基于朽迈的从容基学说，朽迈与细胞的氧化伤害密不可份。枸杞作为人造的抗氧化剂，其抗氧化以及抗朽迈功能患上到了宽泛的关注。近些年来，枸杞功能性食物的钻研以及开辟越来越深
入，特意是枸杞作为抗氧化食物的开辟，已经成为枸杞加工业钻研的热门。

美拉德反映是一种在食物加工历程中宽泛存在的非酶褐变反映，主若是指复原糖与氨基酸、卵白质之间的重大反映。美拉德反映除了能改善食物感官品质，如光华大风韵外，钻研表明，美拉德反映产物中的类黑精具备未必的抗氧化特色，这为追寻以及运用人造抗氧化剂提供了新的思路。

尽管枸杞以及美拉德反映产物均有抗氧化浸染，且具备未必的事实根基，但两者散漫后的产物是否会有更好的成果，当初仍未见报道。以是，本试验接管美拉德反映道理，制备一种褐变黑枸杞新产物，以黑腹果蝇为试验工具，深入探究褐变黑枸杞（brownblackwolfberry，BBW）的抗氧化浸染，从而为美拉德反映产物在功能食物畛域的运用提供事实依据。

一、资料与方式

一、资料与仪器

枸杞由宁夏早康科技有限公司提供，黑腹果蝇，由天津科技大学食物迷信与工程学院食物削减剂与功能配料试验室提供；玉米粉、酵母粉，购自滨海新区明耀超市；无水葡萄糖、琼脂粉，购于天津江天化工有限公司；对于羟基苯甲酸乙酯，购于北京鼎国凋敝生物技术公司；没食子酸、芦丁、福林酚试剂，购于北京索莱宝生物有限公司；过氧化氢酶（CAT）试剂盒、超氧化物比方化酶（SOD）试剂盒（测分型）、考马斯亮蓝试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒，购于南京建成生物工程钻研所。

HWS-850智能恒温恒湿作育箱，宁波海曙赛福试验仪器厂；MultiskanFC酶标仪，美国ThermoFisher公司；UVmini-1240紫外/可见分光光度计，日本岛津仪器公司；MyiQ2实时定量PCR仪，美国Bio-Rad公司；冷冻离神思，美国Thermo公司。

二、试验方式：

（1）褐变黑枸杞的制备

以宁夏枸杞为质料，在75%相对于湿度以及700C条件下部署6d，再在450C的鼓风烘箱中去世板定型。去世板风速0.5m/s，去世板光阴60min即可。患上到的褐变黑枸杞在温水中浸泡、打浆、离心、取上清液，稀释备用。

（2）褐变黑枸杞中总黄酮、总酚以及褐变指数的测定

黄酮类化合物的测定参照SZDB/Z349--2019《黄酮类化合物的测定》中紫外分光广度法；多酚的测定接享福林酚法；褐变指数的测定参照Xia等的方式，从褐变黑枸杞以及红枸杞中提取份子量（＞10kDa）的卵白黑素，在420nm处丈量的OD值作为吸光度。

（3）褐变黑枸杞中主要酚类物资的测定

接管功能液相色谱法。检测条件：色谱柱：C18（250妹妹×4.6妹妹，5μm，）；行动相A：2%甲酸；行动相B：乙腈；柱温35～40C；进样量20uL；流速：0.8mL/min；检测波长：280nm；检测器为SPD紫外检测器，用前过0.45μm膜，脱气，洗脱挨次如表1所示。

（4）果蝇的作育

根基作育基：玉米粉72g，无水葡萄糖72g，琼脂6g，酵母粉10g，40mL防腐剂（1%对于羟基苯甲酸乙酯的75%乙醇溶液），750mL蒸馏水。给药作育基：在根基作育基根基上分说遵照终浓度3mg/mL、12mg/mL削减响应剂量的褐变黑枸杞以及红枸杞。

（5）果蝇寿命试验

收集2d龄的雄、雌性果蝇各1000只，平均分为5组，分说作育在含有0、三、12mg/mL褐变黑枸杞以及红枸杞的作育基内，每一组10管，每一管20只，给药剂量的抉择参照刘玉荷等钻研服从，在一再试验的根基上最终判断。在250⁰C、相对于湿度50%的恒温恒湿作育箱中作育。试验历程中，每一3d替换新的作育基，同时审核果蝇生涯，状态并记实，直至果蝇全副诞生，着重复试验。最后统计果蝇的平均寿命、对于折诞生寿命以及最遐龄命（各组最后20只诞瓜果蝇的天数平均数）。

（6）果蝇急性试验

收集2d龄雄、雌性果蝇各1000只，每一组200只，接管功能液相色谱法。检测条件：色谱柱：C18（250妹妹×4.6妹妹，5μm）；行动相A：2%甲酸；行动相B：乙腈；柱温35～40⁰C；进样量20uL；流速：0.8mL/min；检测波长：280nm；检测器为SPD紫外检测器，用前过0.45μm膜，脱气，作育25d后，饥饿2h，CO2麻醉后导入无作育基的腌臜果蝇试管中，将沾有含30%H2O2的6%葡萄糖水溶液的滤纸条放入试管，保障滤纸条全副浸润但不会有液体流下，每一2h记实果蝇诞生数，直至果蝇全副诞生。

（7）果蝇抗氧化酶活测定

收集2d龄的雌、雄性果蝇各1000只，每一组200只，接管功能液相色谱法。检测条件：色谱柱：C18（250妹妹×4.6妹妹，5μm）；行动相A：2%甲酸；行动相B：乙腈；柱温35～40⁰C；进样量20uL；流速：0.8mL/min；检测波长：280nm；检测器为SPD紫外检测器，用前过0.45μm膜，脱气，作育45d后，禁2h，CO2麻醉后称重，-800C备用。果蝇以及心理盐水1∶49（m/m）冰上匀浆，4⁰C，2500r/min离心，收集上清液测定卵白浓度，T-SOD、CAT精力及MDA含量。

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