甜叶菊（又名甜菊叶、比照别离甜茶、两种甜菊草等），大孔动态多种的钻拉丁名Steviarebaudiana（Bertoni）Hemsl。树脂原产于南美巴拉圭与巴西山脉接壤处，甜菊糖苷近些年来被引进中国江苏、比照别离山东、两种福建等多地种植。大孔动态多种的钻最先在《中草药》中就有记实，树脂甜叶菊味甘、甜菊糖苷怀平，比照别离主消渴与高血压病。两种其运用部位为叶与茎，大孔动态多种的钻一年中春夏秋三季均有愿望，树脂种植情景要求不高，甜菊糖苷是较重大患上到的甜味剂斲丧质料之一。甜菊糖苷是从甜叶菊中制患上的废品，具备甜度高且热量低的短处，当初正逐步开始替换蔗糖、白糖等甜味剂。且有少许钻研表明，甜菊糖苷的二次产物甜菊醇/异甜菊醇可能经由着落肝脏糖异生基因的表白、激活肝脏与肌肉中磷酸化酶、拮抗胰岛素等浸染退出体内糖代谢历程，对于治疗二型糖尿病产生被动浸染。

大孔树脂是外表具备多个孔洞的空心球形颗粒物，属于高份子资料，具备相互吸附与份子筛的物理道理，罕用于污水解决中，现今也常被用于斲丧质料中实用成份的纯化与别离，分为极性与非极性两种，现市面上罕有的别离纯化用树脂多为进一步结构改性树脂，甜菊糖苷专属树脂即非极性改性树脂。以往甜菊糖苷的相干钻研都只因此含量最高的RA以及STE为主，却并未对于其余多少种甜菊糖苷进一步的探究诠释，而本试验用LX-T28与LX-T81两种非极性改性大孔树脂分说对于包罗RA与STE在内的七种甜菊糖苷妨碍吸附/解吸钻研，主要指标在于为工业斲丧甜菊糖苷产物时选用树脂资料提供参考依据，并对于甜叶菊的根基钻研作未必的填补诠释。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1260功能液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；SW-LB32T微量折光糖度计（上海圆迈商业有限公司）；BT100-8数显恒流泵（上海沪西合成仪器厂有限公司）；SHZ-82气浴恒温振荡器（江苏省金坛市中大仪器厂）；1.6×16cm玻璃中低压层析柱（上海联塔仪器有限公司）；ThermoMicroPico17微量台式离神思（美国THERMOSCIENTIFIC公司）；TE602-L电子合终日平（Sartorius公司）；0.22μmPTFE微孔滤膜以及Nylon60.22μm微孔滤膜（天津市科亿隆试验配置装备部署有限公司）；50μL进样针（上海安亭微量进样器厂）。

1.2 试剂与药物

95%可食用乙醇（镇江华东器化玻有限公司）；乙腈、甲醇有机试剂均为HPLC级（国药总体有限公司），水为纯水/清白水（哇哈哈牌）；规范品：RD（≥98%，DST190402-069，成都德思特生物技术有限公司）、Rf（≥98%，DST190802-074，成都德思特生物技术有限公司）、RA（≥98%，PSO945-O025，成都普思生物科技股份有限公司）、STE（≥98%，PS1416-O025，成都普思生物科技股份有限公司）、RC（≥98%，PS0946-O025，成都普思生物科技股份有限公司）、DA（≥98%，19011422，上海同田生物技术股份有限公司）、Rub（≥98%，18112123，上海同田生物技术股份有限公司）；精制的甜菊糖苷粉末（≥95%，20181201，江苏华晶生物科技有限公司）；大孔吸附树脂LX-T2八、LX-T81（西安蓝晓科技新资料股份有限公司）。

2 试验方式

2.1 检测方式

2.1.1 HPLC定性与定量检测

色谱条件：色谱柱LunaC18（2），250*4.6，5μm，（00G-4252-E0）；32%乙腈+68%水为行动相；DAD检测器，210nm检测波长；0.5mL/min流速；20μL进样体积；30℃柱温。

2.1.2 规范曲线

分说配制甜菊糖苷RD、RA、STE、RF、RC、DA、Rub的规范品溶液100、200、300、400、500、600μg/mL，并混分解具备各糖苷的搅浑规范品溶液。在HPLC色谱条件下分说测定峰面积响应值，绘制浓度（μg/mL）-峰面积曲线图，分说患上到各糖苷规范曲线的回归方程：

RD：y=6.8806x-17.180，r²=0.9982/r=0.9991

RA：y=8.1894x-75.987，r²=0.9987/r=0.9993

STE：y=10.706x-39.765，r²=0.9991/r=0.9995

RF：y=7.2153x-16.006，r²=0.9974/r=0.9987

RC：y=8.0646x-35.212，r²=0.9997/r=0.9998

DA：y=11.086x-6.0582，r²=0.9988/r=0.9993

Rub：y=11.240x-14.160，r²=0.9986/r=0.9992

2.2 树脂的预解决

LX-T28与LX-T81两种树脂分说先用1～2BV95％可食用乙醇进柱，流速1～2BV/h，浸泡住宿；随后再用1～2BV95％可食用乙醇洗脱至洗出液与水的搅浑液（1∶2）再也不污浊，再水冲洗树脂床直至无醇味即可投入运用。

2.3 动态吸附

分说称取预解决后的两种湿态树脂（沥干至无水点落状，1BV≈22mL）1g，各退出35mL15mg/mL的甜菊糖苷水溶液（精制的甜菊糖苷粉末配制），在室温（25℃）下中低速率震撼24h后，HPLC测定上清液的成份及含量，合计树脂的动态吸附当量。

2.4 动态解吸

将‘2.3’中吸附饱以及两种湿态树脂用纯水洗涤尽残留的甜菊糖苷溶液，再各退出35mL55%乙醇（95%可食用乙醇配制），在室温（25℃）下中低速率震撼24h后，HPLC测定上清液的成份及含量，合计该洗脱剂下的解吸量。

2.5 动态吸附能源学曲线

分说称取预解决后的两种湿态树脂（沥干至无水点落状）1g，各退出35mL15mg/mL的甜菊糖苷水溶液（精制的甜菊糖苷粉末配制），在室温（25℃）下中低速率震撼25h，收集一、二、四、六、八、十一、25h的上清液，HPLC测定上清液的成份及含量，绘制树脂的动态吸附能源学曲线。

2.6 动态解吸能源学曲线

将‘2.5’中吸附饱以及两种湿态树脂用纯水洗涤尽残留的甜菊糖苷溶液，再各退出35mL55%乙醇（95%可食用乙醇配制），在室温（25℃）下中低速率震撼24h，收集一、二、四、六、八、十一、25h的上清液，HPLC测定上清液的成份及含量，绘制树脂的动态解吸能源学曲线。

2.7 激进曲线/动态吸附曲线

分说称取20g湿态树脂，湿法装填入1.6×16cm的层析柱中。配制15mg/mL浓度甜菊糖苷水溶液，以2BV/h流速上样，每一15min（即0.5BV）收集一次流出液，HPLC检测每一次流出液，当流出液的浓度达上样溶液浓度的10%时的上样体积即为即为饱以及上样体积。

2.8 动态解吸曲线

将‘2.7’中吸附饱以及的树脂，中水冲洗腌臜残留的上样液后，2BV/h洗脱流速，2BV55%乙醇进柱洗脱（洗脱剂用完后用纯水顶出管路中的解吸液），每一15min（即0.5BV）收集一次流出液，HPLC检测每一次流出液，检测洗脱液浓度至‘0’时，达到残缺解吸的洗脱体积。

2.9 单柱别离

两种树脂分说装填在1.6×16cm层析柱中。配制15mg/mL浓度甜菊糖苷水溶液，以2BV/h流速上样，待树脂床吸附饱以及后，中水冲洗腌臜残留的上样液，以2BV/h洗脱流速，2BV55%乙醇进柱洗脱（洗脱剂用完后用纯水顶出管路中的解吸液），每一3min收集一次流出液，HPLC检测每一次流出液，合成多少种甜菊糖苷的出柱先后挨次。

3 服从与合成

3.1 树脂功能参数比照

就工业斲丧来说，树脂的吸附当量与产物产量呈正相干趋势，因此树脂的吸附能耐常作为评估树脂功能的主要指标。经由比照两种树脂的动态吸附当量，以评估树脂对于区别甜菊糖苷的吸附功能与综合吸附性差距。树脂功能参数的差距见下表1。

从表1可能看出，LX-T81对于以上七中甜菊糖苷的动态吸附当量均高于LX-T28，功能更优。其中差距最清晰的是含量最高的RA以及STE，分说是1g树脂可能吸附166.05mg以及72.33mg。此外，同种树脂对于区别甜菊糖苷的吸附能耐也有较为清晰的差距，这种征兆主要源于多少种甜菊糖苷在精制甜菊糖苷粉末中的含量差距，还包罗区别甜菊糖苷的份子量、所带糖基种类与数指标差距，等等因素，综合影响树脂的吸附能耐。

3.2 吸附能源学曲线

实际工业斲丧中，除了指标产物的产量，吸附速率即达到树脂吸附饱以及的光阴快慢，也是评估树脂功能的紧张参数之一，见下图1。

从图1可能发现，LX-T28与LX-T81的树脂吸附能源学曲线的变换趋势简直残缺不同。表如今0～2h内七种甜菊糖苷的吸附当量随光阴削减而变大，而在2h后吸附当量都趋于晃动，诠释两种树脂均为较功能的吸附树脂，达到吸附饱以及的光阴相近，而曲线中斜率（吸附速率=吸附当量/光阴）则表明LX-T81吸附速率稍快于LX-T28。此外，在0～2h内，可能清晰发现七种甜菊糖苷的吸附速率均有较为清晰的差距，挨次是RA最快，随后是STE、RC、RF、Rub、RD，DA最慢。

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