红花，卵白为一年生木本菊科红花属动物，酶酶植株呈冠状，解红主茎健壮，花籽花丝多呈红、工艺桔红、条件桔黄、钻研黄、卵白浅黄、酶酶白等色。解红种子为瘦果，花籽种皮色分白、工艺灰、条件黑、钻研黑褐，卵白花期为每一年的6～7月份，果期为8～9月份。红花籽粕是红花籽提油后的副产物，榨油后的红花籽粕有两种：即带壳籽粕以及去壳籽粕，其中带壳的卵白质含量为19%，而去壳的卵白质含量高达40%。纵然带壳籽粕的营养价格也可能与苜蓿相媲美，在畜牧业中用作饲料削减，可为肥育牲口的饲料；而去壳籽粕则更与亚麻子油饼相似，在母鸡饲料中可直取代代卵白质削减。有报道称，经由对于全副市售红花籽粕的钻研，营养指标测定如下：其中粗卵白质20%、粗纤维31%、粗卵白消化率78%、粗纤维消化率14.3%，因为其消化率较高，特意适用于作为奶牛饲料，对于产奶量及品质都有很洪流平的普及，是一种十分具备开辟价格的副产物；红花籽粕所含卵白氨基酸属于残缺氨基酸，含有人体所需的18种氨基酸，其中8种必须氨基酸含量较高，约占氨基酸总量的30%左右；此外，红花籽粕在农业中可用做抗冻剂、抗虫剂以及有机肥料等。

红花籽粕含有充实的卵白，其制备成的抗氧化肽具备较强的复原力，国内对于红花籽粕卵白运用钻研的比照少，为普及红花籽粕运用远景，本钻研选取木瓜卵白酶，并退出超声辅助水解，对于红花籽粕卵白的提取工艺妨碍优化，为红花籽粕的综合运用及开辟相干高附加值的功能性食物提供技术依据。

一、试验资料与方式

一、资料与仪器

红花籽粕：新疆产地；木瓜卵白酶、胰卵白酶以及枯草芽孢杆菌中性卵白酶：上海多比实业有限公司；三氯化铁、铁氰化钾、30%过氧化氢、硫酸、硼酸、盐酸、磷酸氢二钠、无水乙醇、氢氧化钠、酚酞、三氯乙酸、甲醛、碱性品红、磷酸二氢钠：购于郑州莱博仪器配置装备部署有限公司；试剂均为合成纯。UNIVERSAL320高速冷冻离神思：Hettich有限公司；AUY120合终日平：SHIMADZUCORPOPATIONJAPAN；722E可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司；ALPHAL-2真空冷冻去世板机：德国M.CHRIST公司；HH恒温水浴锅：江苏金坛中大仪器厂；PHS-25酸度计：上海雷磁仪器厂：C21-IH02E9电磁炉：浙江苏泊尔股份有限公司；YP202N电子天平：上海详尽仪器仪表有限公司。

二、试验方式

（1）试剂的配制

pH7.0磷酸盐缓冲液：量取61mL的0.02mol/L磷酸氢二钠溶液以及39mL的0.02mol/L磷酸二氢钠，搅浑平均，即为pH7.0磷酸盐缓冲液。

0.02mol/L氢氧化钠规范溶液：称取0.8g氢氧化钠溶于水，定容至100mL。0.05mol/L甘氨酸规范溶液：精确称取375mg甘氨酸，消融后定容至10mL。400mL中性甲醛溶液：在50mL36%～37%合成纯甲醛溶液中退出1mL0.5%酚酞乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。

（2）红花籽粕酶解液的制备

提油后的红花籽粕用高速破碎捣毁机妨碍破碎捣毁，过50目筛，取2.5g红花籽粕于小烧杯中，退出50mLpH7.0的磷酸缓冲溶液，于水浴锅55℃水解1h，灭酶活（100℃，10min）在10000r/min转速下冷冻离心15min，取上清液，备用。

（3）酶精力的测定

①超声波先后酶精力的测定

豫备6支腌臜的试管，分说取酶液1mL于试管中，木瓜酶液、中性酶液、胰卵白酶液各两支试管，其中三支作空缺比力，此外三支挨次退出3mLpH7.0磷酸缓冲液，37℃水浴锅中预热10min，退出pH7.0磷酸缓冲液配制的1%酪卵白溶液1mL，摇匀，37℃水浴10min或者55℃条件下用超声波解决10min，，掏出退出10mLTCA（三氯乙酸）溶液妨碍反映，猛烈摇动，37℃水浴半小时，冷冻离心取上清液作7倍稀释，275nm处测吸光度值A。空缺比力：在退出底物以前退出TCA溶液。

②卵白酶酶精力合计

豫备6支腌臜的试管，分说取酶液1mL于试管中，木瓜酶液、中性酶液、胰卵白酶液各两支试管，其中三支作空缺比力，此外三支挨次退出3mLpH7.0磷酸缓冲液，37℃水浴锅中预热10min，退出pH7.0磷酸缓冲液配制的1%酪卵白溶液1mL，摇匀，37℃水浴10min或者55℃条件下用超声波解决10min，，掏出退出10mLTCA（三氯乙酸）溶液妨碍反映，猛烈摇动，37℃水浴半小时，冷冻离心取上清液作7倍稀释，275nm处测吸光度值A。空缺比力：在退出底物以前退出TCA溶液。每一分钟水解产生1µg酪氨酸所需的酶量，即为1个酶活单元（U）。由酪氨酸规范曲线方程（A=aC+b）及酶活界说推患上：

酶活=（A-b）×N/（a·水解光阴）（1）

式中N为稀释倍数8；

A为吸光值；

酶活单元为U/mL。

（4）L-酪氨酸规范曲线的建树

精确称取于105℃去世板至恒重的L-酪氨酸0.1g，用20mL1mol/L盐酸消融后，再用蒸馏水定容至100mL，即为1mg/mL酪氨酸规范溶液。排汇1mg/mL酪氨酸规范溶液10mL，用0.1mol/L盐酸定容至100mL，即患上到100µg/mL的L-酪氨酸规范液。分说排汇100µg/mL的L-酪氨酸规范液0、一、二、三、四、五、6mL于10mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，制成每一毫升分说含L-酪氨酸0、十、20、30、40、50、60µg的规范运用液，在275nm下测定各浓度酪氨酸溶液的吸光值，以酪氨酸浓度为横坐标，以该浓度下溶液所对于应吸光度为纵坐标作规范曲线，合计回归方程以及R2值。

（5）水解度确凿定。

水解度DH=游离氮/总氮

①测总氮量（凯氏定氮法）

参考GB5009.5妨碍总氮的测定，在妨碍样品测定的同时做试剂空缺，合计总氮含量。

②甲醛滴定法测定游离氮

移取2mL抽滤的水解液，分说置于250mL的锥形瓶中，加水25mL；其中一份加3滴中性红调唆剂，用标定的NaOH溶液滴定至琥珀色为尽头。另一份退出中性甲醛10mL及3滴百里酚酞调唆剂，摇匀，静置1min，（此时蓝色消逝）。再用上述标定过的NaOH溶液滴定至淡蓝色。记实两次滴定所斲丧的NaOH的毫升数，合计游离氮的含量。

（6）复原力的测定

配制一系列浓度为5%的红花籽粕底物溶液（取2.5g籽粕，加缓冲液50mL），分说退出中性卵白酶、木瓜卵白酶、胰卵白酶，先调节pH，妨碍超声波解决10min，水解反映1h，反映结束日后经由100℃灭酶解决10min，在10000r/min转速下妨碍冷冻离心，光阴为15min，上清液经由冷冻去世板后备用。选用上清液来测定酶解液的复原能耐。

取上清液备用，将酶解液稀释1倍，取1.0mL红花籽粕酶解液于10mL的试管中，挨次退出0.2mol/LpH6.6的磷酸盐缓冲液2.5mL、品质分数为1%的铁氰化钾溶液2.5mL而且短缺搅浑平均，于50℃条件上水浴连结20min，并迅速冷却，而后退出品质分数为10%三氯乙酸溶液2.5mL，而且短缺搅浑平均，在3000r/min转速冷冻离心10min。排汇离心后的上清液2.5mL，退出蒸馏水2.5mL以及品质分数为0.1%三氯化铁溶液0.5mL，静置10min，在700nm波长下测定溶液吸光值，所有测定值均为三次数据平均值。以700nm波短处的吸光值巨细来反映酶解液的复原力的巨细，吸光值越大，表明酶解液的抗氧化性越强。

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