一、果汁指标要求

一、饮料养分家养分解色素的解色测定道理及方式。

二、测定清晰以及熟习功能液相色谱仪的果汁使命道理及操作要点。

三、饮料养分把握功能液相色谱技术测定家养分解色素的解色方式。

二、测定试验道理

食物中家养分解色素用聚酰胺吸附法或者用液-液调配法提取，果汁制成水溶液，饮料养分注入功能液相色谱仪，解色经反相色谱别离，测定依据保存光阴以及峰面积遏制定性以及定量。果汁

三、饮料养分试验仪器与试剂

一、解色试剂

①甲醇：合成纯，经滤膜(FH 0.5μm)过滤。

②乙酸铵溶液：0.02mol/L。称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，消融，经滤膜(HA 0.45μm)过滤。

③氨水(2+98)的0.02mol/L乙酸铵溶液：量取氨水(2+98)O.5mL，加0.02mol/L乙酸铵溶液至1000mL。

④聚酰胺粉：过200目。

⑤甲醇一甲酸溶液：6:4。量取甲醇60mL，甲酸40mL，混匀。

⑥柠檬酸溶液：200g/L。称取20g柠檬酸，加水至100mL，振摇消融。

⑦乙醇-氨水-水溶液：7:2:1。取无水乙醇70mL，氨水20mL，水10mL混匀。

⑧三正辛胺-正丁醇溶液：5:95。量取三正辛胺5mL，加正丁醇95mL，混匀。

⑨饱以及硫酸钠溶液。

⑩硫酸钠溶液：20g/L。称取20g硫酸钠，消融于1000mL蒸馏水中，振摇消融。

⑪正己烷：合成纯。

⑫pH=6水：在水中加200g／L柠檬酸调pH到6。

⑩着色剂规范溶液：柠檬黄、13落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝按其纯度折算为100％品质，配成1.00mg/mL的pH=6水溶液，临历时加pH=6水稀释成50.0μg/mL。经滤膜(HA0.45μm)过滤。

二、仪器

功能液相色谱仪，紫外检测器。

四、试验步骤

称取20.0～40.0g橘子汁，放入100mL烧杯中。含二氧化碳的样品加热驱除了二氧化碳。

二、色素提取

①聚酰胺吸附法：样品溶液加200g／L柠檬酸调至pH=4，加热至60⁰C，将lg聚酰胺粉加少许水调成糊状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂熔漏斗抽滤，用60⁰C的水(pH=4)洗涤3～5次，而后用甲醇一甲酸搅浑液洗涤3～5次(含赤藓红的样品不能洗)，再用水洗至中。用乙醇-氨水-水搅浑液解吸3～5次，每一次5mL，收集解吸液，加乙酸中以及，蒸发至近干，加水消融，定容至4mL。经滤膜(HAO.45μm)过滤，取lOμL进功能液相色谱仪。

②液-液调配法(适用于含赤藓红的样品)：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加20mL盐酸、三正辛胺-正丁醇溶液(5+95)10～20mL，振摇，提取，分取有机相。重复此操作，并吞有机相，用饱以及硫酸钠溶液洗2次，每一次10mL，分取有机相，放至蒸发皿中，水浴加热稀释至10mL，转移到分液漏斗中，退出60mL正己烷，混匀。加氨水(2+98)提取2～3次，每一次5mL。并吞氨水层(含水溶性色素)，用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水消融，定容至5mL。经滤膜(HA0.5μm)过滤，取lOμL进功能液相色谱仪。

三、功能液相色谱条件

①色谱柱：YWG-C₁₈，4.6妹妹×250妹妹，10μm，不锈钢柱。

②行动相：甲醇：0.02mol／L的CH₃COONH₄溶液(pH=4)。

③梯度洗脱：甲醇20％～35％，3％/min；35％-98％，9％/min；98％不断6min。

④流速：1mL/min。

⑤检测器：紫外检测器，波长254nm。

依据保存光阴定性，外标峰面积法定量。

五、留意事变

一、样品在退出聚酰胺粉吸附色素以前，要用200g/L柠檬酸调至pH=4，因为聚酰胺粉在偏酸性(pH=4～6)条件下对于色素的吸附能耐较强，吸附较残缺。

二、假如样品色素浓度过高，要用水适量稀释，因为在浓溶液中，色素钠盐的钠离子不重大解离，无益于聚酰胺粉吸附。

三、样液中的色素被聚酰胺粉吸附后，当用热水洗涤聚酰胺粉以便作废可溶性杂质时，要求水偏酸性，防御吸附的色素被洗脱下来，使定量服从偏低。

四、在提纯的样品溶液妨碍蒸发稀释时，要操作水浴温度在70～80⁰C之间，使其飞快蒸发，勿溅出皿外，此外要每一每一摇动蒸发皿，防御色素干结在蒸发皿的壁上。

参考资料：食物中有毒有害物资检测

相干链接：乙酸铵，聚酰胺粉，柠檬酸