1.2.6 OGE的硬脂燕麦临界群集浓度

临界群集浓度的测定运用荧光探针法，方式参照文献并稍作更正。酸修饰的束豫备称取芘规范品配制浓度为3×10^-4mol/L的多糖芘甲醇溶液。取10mL的自群制备具塞试管，每一管中退出3×10^-4mol/L的集胶及芘甲醇溶液20μL后，用氮气将溶液中的特色甲醇吹干。选取区别取代度的初探OGE，再向每一管中退出10mL区别取代度、硬脂燕麦区别浓度（0.0002～3mg/mL）的酸修饰的束OGE溶液，此时芘的多糖最终浓度为6×10^-7mol/L，室温下避光高速搅拌5h后，自群制备运用荧光分光光度计测定芘的集胶及发射光谱。测定条件：激发波长330nm，特色发射以及激发狭缝均为5nm，初探发射光谱的硬脂燕麦扫描畛域350～500nm。记实I₁（374nm）以及I₃（385nm）处的荧光强度。以OGE浓度的对于数为横坐标，I₁/I₃的值为纵坐标绘制散点图，并妨碍曲线拟合后，求两拟合曲线交点处的横坐标，换算成浓度，此时的浓度即临界群集浓度。

1.2.7 OGE的消融度

称取未必取代度的OGE，配制成2.0mg/mL的溶液，将溶液于100℃下加热15min后掏出，离心20min（3000×g），收集上清液烘干称重，并记实，按式（2）合计其消融度。

1.2.8 OGE的细胞毒性合成

从液氮罐中掏出装有Raw264.7细胞的冻存管1支，37℃水浴昏迷、传代、定期换液等使命。试验开始前退出别致DMEM高糖作育基（含10%FBS）制成细胞悬液，1000×g离心5min后，弃上清后，退出别致作育液，悬浮细胞计数。将细胞浓度调成3×10⁴个/孔的密度，以100μL/孔接种于96孔细胞作育板中。置于37℃，5%CO₂作育箱中住宿，使细胞短缺贴壁，弃上清后，以100μL/孔退出区别浓度（25，50，100，200μg/mL）的OGE溶液至各孔中，每一组配置6个重复孔。在37℃，5%CO₂作育箱中作育24h后，退出10μLCCK-8液，再放入细胞作育箱中作育2h左右，在波长450nm处测定吸光值（OD值）。

式中，A₁—试验孔吸光值（OD值）；A₂—比力空吸光值（OD值）；A₀—空缺孔吸光值（OD值）。

1.2.9 数据解决

本试验各数据接管“平均值±规范偏差”呈现。运用MestReNova软件妨碍NMR图谱数据解决，SPSSStatistics24统计学软件妨碍正交试验妄想及服从合成，接管单因素方差合成妨碍各组间指标差距比照，P＜0.05为有统计学意思。

2 服从与合成

2.1 燕麦β-葡聚糖硬脂酸酯（OGE）的制备

2.1.1 硬脂酸活化液削减量对于取代度的影响

有报道称，脂肪酸酯化多糖的反映是可逆的。因此，硬脂酸酰基咪唑的削减匆匆使该酯化反映向正偏差不断妨碍。从图1可能清晰地看出，随着硬脂酸酰基咪唑削减量不断削减，产物取代度也不断削减。判断因为随着硬脂酸酰基咪唑削减量的削减，燕麦β-葡聚糖与酰基咪唑之间的碰撞频率也随之不断增大，使患上整团系统中的酯化功能响应普及。不断削减硬脂酸酰基咪唑时，硬脂酸酰基咪唑与燕麦β-葡聚糖中的羟基基团发生的反映也逐步趋于饱以及，反映速率缓解，取代度的削减趋势也变患上较为飞快。
 

2.1.2 反映温度对于取代度的影响

图2是酯化反映温度对于产物取代度的变换图，其中，当反映系统的温度从70℃升至80℃时，酯化产物的取代度从0.036削减至0.057后，不断着落系统的反映温度，对于酯化反映的影响不是很大，取代度数值变换较小，并趋于笔陡。可能因为温度着落，大份子链的活性也响应增强，匆匆使反映系统中份子间的实用碰撞次数削减，取代度随之发生变换。当反映系统中退出反映的份子达到饱以及时，实用碰撞的次数再也不削减，取代度的变换也趋于晃动。

2.1.3 反映光阴对于取代度的影响

依据酯化反映的事实合乐成果，酯化反映会随着光阴的缩短逐步达到一个极限值。如图3所示，随着酯化反映光阴的不断缩短，取代度响应着落，燕麦β-葡聚糖的酯化反映也越短缺。酯化反映在4.5h前，因为系统中天生的OGE浓度较低，使患上系统中的酯化反映可能不断妨碍。而当整团系统在反映妨碍到5.0h时，产物的取代度削减幅度变患上飞快，此时反映系统中的酯化反映与分解反映行将失调。因此，反映光阴并不能有限缩短上来。

2.1.4 OGE制备条件的优化

运用SPSSStatistics24软件妨碍正交试验妄想，接管3因素3水平进一步钻研硬脂酸活化液削减量（A）、反映温度（B）以及反映光阴（C）对于OGE取代度的影响，判断出OGE的最佳制备条件。

从表1中可能清晰的患上到此反映中OGE的最佳制备条件，即当硬脂酸酰基咪唑削减量为6.50mL，反映温度为90℃，反映光阴为5.0h时，有最大取代度，为0.133。

2.2 OGE的详情景状及粒径

分说配制1mg/mL的燕麦多糖溶液以及同品质浓度的OGE溶液作比力可能看出，OGE溶液加倍污浊，且下层有良多泡沫存在，而燕麦多糖溶液则澄澈，且简直无泡沫存在。判断是因为在原燕麦β-葡聚糖中接入了硬脂酸，硬脂酸自身具备乳化、晃动及润滑浸染有可能也带入到OGE中，使患上OGE液体上方泛起诸多泡沫。

占无关报道，两亲性多糖在较低浓度下可能组成壳核结构的自群集胶束，纳米胶束的详情景状大多呈球状。如图5所示，OGE在扫描电镜下可能清晰地看出其详情景状为球形，较原燕麦β-葡聚糖的粒径更小，巨细加倍均一。原燕麦β葡聚糖有干瘦状的球形，而经由改性后的两亲性多糖愈加丰满。

大少数两亲性多糖组成的胶束的PDＩ都十分窄。PDＩ值越小呈现粒径扩散越窄，颗粒巨细越均一。有钻研表明，当PDＩ＞0.7时，代表颗粒的粒径扩散较宽。正如表2所示，OGE的PDＩ＜0.7，可觉患上OGE的粒径巨细较为均一，与扫描电镜泛起的表不雅形态不同。可是在区别取代度下，OGE的粒径巨细也存在差距，随取代度的削减，OGE的粒径巨细反而着落。可能因为OGE自身组成的胶束系统中，区别取代度下的比外表积以及外表能的差距，导致自觉的粒子群集水平区别所致。疏水改性后的多糖比照拟原糖来说，即取代度为0时，粒径更小，其PDＩ值也越小。

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