丹参是丹参大孔唇形科动物丹参(SalviamiltorhizaBge)的去世板根以及根茎。味苦；性微寒。树脂功能主治：通经止痛，优化研活血化瘀，工艺凉血消痈，抗操清心除了烦。劳活用于症瘕积攒，性钻胸痹心痛，丹参大孔心烦不眠，树脂热痹痛苦悲痛，优化研痛经经闭，工艺月经不调，抗操疮疡肿痛。劳活丹参的性钻活性成份有脂溶性成份丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ-A、丹参大孔隐丹参酮以及水溶性成份丹参素、原儿茶醛等。其中丹参酮(tanshinone)类作为丹参的主要实用成份，有较强的心理活性以及宽泛的药理浸染，包罗血汗管药理浸染、人造抗氧化、性激素浸染、抗肿瘤浸染等。操劳又称困倦，是一种主不雅不适感应，但主不雅上会在划一条件下患上到其实现原来所处置的个别使命以及行动的能耐。如今社会加速的生涯节奏以及增大的社会相助及家庭压力，使操劳人群不断削减，且水平愈加严正，发生后假如不实时缓解，就会逐步积攒，最终导致机体的神经、内渗透及免疫等系统调节个别，严正的会导致器质性病变，严正影响人身心瘦弱。因此对于抗操劳药物的钻研意思严正。一些文献以及专利报道了对于丹参酮的提取别离，但提取方式重大且老本高，限度了对于丹参酮的深入钻研。本试验运用大孔树脂对于丹参提取物妨碍别离优化，此方式环捍卫生、节约老本。大孔吸附树脂色谱的道理是吸拥护份子筛道理相散漫。近些年来该技术已经宽泛运用于中药新药研发以及中药制剂研发斲丧中，根基已经成为别离中药化学成份的主要伎俩之一，具备抉择性好，吸附速率快，别离解决量大，可再生重复运用节约老本等特色。

一、资料与仪器

一、资料、试剂

丹参根，山东省泰安市化马湾20171121，经山东中医药大学李佳传授判断为丹参根；丹参酮规范品HPLC＞=98%，100mg/瓶；无水乙醇，试剂均为合成纯；水为蒸馏水或者划一纯度的水；大孔树脂D-290、D-30一、D-10一、D-20一、AB-8。美国洋参冲剂(规格：4g/袋，金日制药有限公司，批号：20170823)。肝糖原测定试剂盒，血乳酸测定试剂盒，血清尿素氮测定试剂盒，上海加科生物科技有限公司。

二、仪器

紫外-可见分光光度计，UV2550，日本岛津公司；HH-S4型数显恒温水浴锅，常州国宇仪器制作有限公司；DHG-9070A型电热恒温鼓风去世板箱，郑州南北仪器配置装备部署有限公司；TDL-80-2B离神思价上海安亭迷信仪器有限公司；YP-B电子天平，上海光正医疗仪器有限公司；YRE-501旋蒸仪，巩义市予华仪器有限公司；Agilent1260型功能液相色谱仪(Agilent1260四元泵，DAD检测器，LC1260色谱使命站)；TC-C18色谱柱(5μm，4.6妹妹x200妹妹)；游泳玻璃缸，自制；详尽移液器、一次性吸头。

三、试验动物

腌臜级昆明小鼠，雄性，体重20g～24g；由北京维通利华试验动物技术有限公司上海分公司提供，斲丧答应证号SCXK(沪)20012-0005。

二、单因素提取优化工艺

一、丹参提取液的制备(以最佳条件为例)

称取未必量丹参根，用动物破碎捣毁机破碎捣毁，过40目筛。称量200.0g置于2000mL圆底烧瓶中。退出8倍量(1600mL)85%乙醇，水浴锅在70℃下回流提取3h，抽滤，滤液保存，滤渣重新倒入圆底烧瓶，重复以上试验2次后，滤液保存，滤渣销毁。将全副滤液置于圆底烧瓶中，温度配置为50℃，转速为30r/min，妨碍旋蒸，稀释滤液至1.3～1.35g/mL。丈量稀释后的滤液体积，向其中退出3倍量热水，将该溶液置于50mL离心：管中妨碍离心，光阴10min，转速4000r/min。离心停止后审核上清液色调，重复下面步骤至上清液为无色，离心留下积淀，用药匙将积淀转移到蒸发皿中。积淀在60℃水浴锅内蒸干，患上到丹参提取物，称量积淀品质，备用。

二、影响丹参提取液中丹参酮纯度的因素

回流时乙醇浓度、回流光阴、回流温度均可影响丹参酮纯度。

回流乙醇浓度判断：75%、85%、95%。

回流温度判断：60℃、70℃、80℃。

回流光阴判断：2h、3h、4h。

遵照表1条件妨碍试验。

三、大孔树脂的筛选

（1）树脂的预解决

新树脂首先用3mol/LNaOH浸泡8h，接着用水洗涤至中性，再用3mol/L的HCl浸泡8h，用水洗至中性，再用95%乙醇浸泡24h，最后用水洗到树脂无醇味。

（2）大孔吸附树脂型号的抉择

精确称取预解决过的大孔树脂各1.0g，分说退出100mL丹参提取液置于250mL锥形瓶中，在水浴摇床(25℃、100～120r/min)上振荡24h，测定吸附失调后溶液中丹参酮的含量。接着用蒸馏水洗树脂三次来作废外表残留的样液，再退出50mL70%乙醇解吸24h后合计解吸率。以大孔树脂的剖析率、吸附率为指标，抉择最优的大孔树脂。

吸附能耐=(Co-Cv)xV/W

吸附率(%)=(Co-C₁)/Cox100

剖析率(%)=(C₂xV₂)/[(Co-C₁)xVo]x100

式中：Co为初始样液浓度，

C₁为失调浓度，

C₂为洗脱液浓度，

Vo为初始样液体积，

V₂为洗脱液体积，

M为树脂干重。

四、大孔树脂优化丹参酮的条件优化

（1）吸附剂以及上样浓度的抉择

将8份预解决好的D101大孔吸附树脂湿法装柱，将丹参提取液溶于25%、35%、45%、55%、65%、75%、85%、95%的乙醇后上样。审核区别吸附剂对于大孔树脂吸附成果的影响。

将5份预解决好的树脂用湿法装柱，蒸馏水短缺失调，而后将浓度分说为二、四、六、八、10mg/mL的丹参提取液以2BV/h的流速上样吸附，每一0.5BV的流出液收集1份，测定流出液的丹参酮浓度，绘制泄露曲线，依据曲线判断上样浓度。

（2）剖析液的抉择

将粗提物溶于55%乙醇后上样。分说用60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%的乙醇妨碍洗脱，经由薄层色谱检测洗脱液中含有的成份[睁开剂为煤油醚(60～90℃):丙酮=4:1]，HPLC检测各浓度洗脱液中丹参酮的纯度，判断适量的洗脱剂。

（3）上样流速对于解吸成果的影响

将5份预解决好的树脂湿法装柱(30mL)，将50mL提取液经大孔树脂残缺吸附后，用150mL，50%的乙醇分说以一、2.三、四、5BV/h的流速上样吸附，合计剖析率。审核上样流速对于解吸成果的影响。

五、丹参酮纯度的检测

丹参提取液溶于70%乙醇经由D101大孔树脂优化后，患上到含有丹参酮的洗脱液。洗脱液经由旋转蒸发仪稀释脱醇，患上到丹参酮粗提液。

功能液相色谱条件：AgilentTC-C18色谱柱(4.6妹妹x250妹妹，5μm)，行动相乙腈-水，等梯度洗脱；流速：1.0mL/min；测定波长：250nm；柱温：35℃，进样量10u。

六、抗操劳试验

（1）动物给药及分组

将100只雄性昆明小鼠(体重20～24g)随机分成五组，每一组20只。遵照中国药典以及《保健食物魔难与评估技术规范》(2003版)，小鼠遵照空缺组、阴性比力组、丹参酮低剂量组、中剂量组、高剂量组随机分为5组，空缺比力组小鼠给以蒸馏水灌胃，阴性比力组给以洋参冲剂250mg/kg。给以丹参酮低剂量(200mg/kg)中剂量(400mg/kg).高剂量(1g/kg)。

（2）负重游泳试验

小鼠遵照各剂量组分组，每一组20只，遵照陆续灌胃给药20d，于末次灌胃1h后，在其尾巴根部环抱瓜葛自身品质5%的铅块，负重后置于水温为25(±1)℃，水深30cm的塑料箱中，审核其负重游泳状态，记实小鼠从开始游泳到诞生的光阴，即小鼠的负重游泳光阴。

七、抗操劳指标测定

依据《保健食物魔难与评估技术规范》(2003版)的要求以及相干文献妨碍试验。将小鼠遵照各剂量组分组，每一组20只，陆续灌胃给药20d，末次灌胃30min后，置于水温25(+1)℃、水深30cm的塑料箱中不负重游泳90min后掏出擦干。摘取眼球采血，接管试剂盒法测定血清中尿素氮以及乳酸的含量，接着正法小鼠，掏出肝脏，用试剂盒测定肝糖原含量。

八、数据解决方式

用Excel建树试验数据库，组间比照单因素方差合成。

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