当初，纳芽国内外的菜孢纳豆相干食物种类良多，如纳豆复合饮料、杆菌纳豆品味片、发酵纳豆压片糖果等。牡蛎纳芽菜孢杆菌与益生菌相似，艺钻研在愿望孳生历程中可能产生多种代谢产物：①多种活性抗菌物资，纳芽可能实用地抑制梵衲氏菌等多种致病菌，菜孢可能增长消化，杆菌增强免疫力；②维生素类物资，发酵如维生素K2可能与寡糖偶合，牡蛎从而使机体更实用地运用营养物资；③)&ga妹妹a;-多聚谷氨酸(&ga妹妹a;-PGA)，艺钻研在抑菌包装方面具备很大的纳芽运用价格；④低聚果糖，可用作可食用淀粉薄膜的菜孢功能性成份；⑤纳豆激酶，具备高纤维卵白消融活性，杆菌可用作血汗管疾病的治疗药物。因为份子量较低且对于pH低的情景晃动性高，因此可用于口服。因为可能产生如斯泛滥的活性物资以及功能性物资，因此纳芽菜孢杆菌具备多种运用价格，可作为食物防腐剂、微生态制剂、抗菌剂、免疫增强剂等。

牡蛎的卵白质含量高，维生素、锌的含量充实，具备高营养价格。但生牡蛎可能含有有害细菌，比喻副溶血性弧菌以及梵衲氏菌都是罕有的食源性病原菌，因今生食牡蛎有未必的牢靠隐患。本文以牡蛎为质料，经由纳芽菜孢杆菌发酵制患上的富含氨基酸类物资的发酵液经稀释后可用于开辟营养口服液，也可用于生物肥料、动物饲料等，可能着落牡蛎及其废品生食潜在的牢靠隐患，同时普及牡蛎加工运用可能性，普及牡蛎经济附加值。

一、资料与方式

一、资料

牡蛎：市售；纳豆菌发酵粉：上海贺普实业有限公司；卵白胨、牛肉膏、酵母膏，国药总体化学试剂有限公司。

二、仪器与配置装备部署

DH-600AB电热恒温作育箱：北京复原伟业仪器有限公司；LS-50HD立式压力蒸汽灭菌器：江阴滨江医疗配置装备部署有限公司；722紫外分光光度计：上海佑科仪器仪表有限公司。

三、方式

（1）纳芽菜孢杆菌的活化及纯化

纳芽菜孢杆菌的活化以及纯化参照宋光艳的操作历程。于无菌条件下取0.3g的纳芽菜孢杆菌发酵粉于装有5mLLB液体作育基的试管中，37℃作育24h，而后用移液枪排汇1mL菌悬液至LB液体作育基试管中转接2代复原菌种精力。于无菌条件下将活化后的纳芽菜孢杆菌妨碍纯化，37℃作育24h，而后在无菌条件下挑取形态优异的菌落接种于LB液体作育基试管中，在37℃的条件下作育24h，最后将菌种转接至LB固体斜面作育基中并于4℃条件下冷藏保存。

（2）牡蛎发酵作育基制备

牡蛎肉解冻，洗涤腌臜，作废杂质，在操持机中打成糊状，分装至250mL锥形瓶中，牢靠料液比1:4(g／mL)、发酵温度37℃，调节pH，葡萄糖削减量2％，于121℃下低压灭菌15min，患上到牡蛎发酵作育基。

（3）单因素试验优化发酵工艺

本试验将牢靠料液比1:4(g／mL)、发酵温度37℃以及葡萄糖削减量2％，纯化后冷藏菌种接种于LB液体作育基中活化，调配至菌悬液浓度为10⁷cfu／mL。分说以发酵pH、接种量以及发酵光阴为变量，妨碍单因素试验，每一组试验接管三个平行以及一组空缺比力，其中发酵pH为五、六、七、八、9；接种量为2％、4％、6％、8％、10％；发酵光阴为12h、24h、36h、48h、60h。空缺比力组为发酵pH七、接种量O％、发酵光阴12h、24h、36h、48h、60h各一个。以发酵液中氨基态氮含量为测定指标，钻研三个因素对于牡蛎发酵成果的影响，对于发酵工艺妨碍开始优化。

（4）正交试验优化发酵工艺

在妨碍单因素试验以及合成数据服从后，抉择适量的发酵pH条件畛域、接种量以及发酵光阴，以及空缺比力组妨碍三因素三水平L₉(3⁴)正交优化试验。

（5）卵白质含量的测定

接管考马斯亮蓝法测定卵白质含量。详尽操作流程如下：

（6）氨基态氮含量的测定

参照国标GB18186-2000《酿造酱油》规定接管甲醛电位滴定法测定氨基态氮含量。详尽操作流程如下：

二、服从与合成

一、单因素试验服从

如图1所示，在发酵光阴以及接种量未必的根基上，当牡蛎作育基的pH为5～7时，氨基态氮的含量呈回升趋势，在pH为7时氨基态氮的含量达到了最高值，pH为7～8时氨基态氮含量稍有着落，pH为8～9时着落较为清晰，这可能是因为纳芽菜孢杆菌愿望的最适pH为7，而且纳豆激酶在pH为7时纳豆激酶精力最高。卵白质含量在pH为5～7时呈着落趋势，从pH7～9则呈回升趋势。可能与纳豆芽孢杆菌产酶精力着落无关。

申明：本文所用图片、翰墨源头《中国食物削减剂》，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割

相干链接：芽孢杆菌，氨基态氮，激酶，卵白胨