本文建树一种接管功能液相色谱测定甜茶叶中甜茶苷含量的利勤方式。依据试验服从，勉用甜茶苷测定前解决历程中，液相研以30%乙腈溶液为溶剂，色谱接管超声方式对于甜茶叶妨碍解决能取患上最佳的法测方式甜茶苷提取率。色谱条件：C18柱（250妹妹×4.6妹妹×5µm）；行动相：0.05%磷酸溶液-乙腈（68+32）；流速：1mL/min；检测波长：210nm；进样量：5µL；柱温：40℃；外标法定量。定甜的钻在该色谱条件下，茶叶茶苷甜茶苷浓度为0mg/mL～1.5mg/mL的中甜畛域内，甜茶苷峰面积（Y）与甜茶苷浓度（X）具备优异的含量线性关连，线性回归方程Y=21.0844X，利勤关连系数r=1.0000；加标接管率为96.2%～102.3%；详尽度（RSD）为1.23%。勉用相干试验数据证实，液相研该方式快捷重大、色谱重复性好、法测方式精确，定甜的钻适用于甜茶叶中甜茶苷含量的测定。

1引言

甜茶（RubussuavissimusS.Lee）是蔷薇科动物甜叶悬钩子属多年生有刺灌木，广西家养甜茶为多年生纯人造、原生态、无传染常绿木本动物，是广西特有的野活泼物，主要愿望在广西梧州、桂林及柳州等区域的。其适量天生在亚热带天气区及海拔500-1000m的丘陵山地，因为其叶片味甜，故名甜茶。甜茶是一种低热能的人造甜味动物。家养甜茶具备至关高的营养价格，其中以广西甜茶最为代表，含有极高的甜茶苷以及茶多酚外，还含有18种氨基酸及人体所必须的微量元素等成份，其中甜茶苷是一种二萜葡萄糖低热量甜料，在化学结构上与甜菊苷类似，它们均由相同的苷元组成，两者的区别仅在甜茶苷中十位碳上少接一份子葡萄糖。甜茶苷的甜度为蔗糖的300倍，而热值仅是蔗糖的5%，属高甜度、低热能的人造甜味物资。甜茶苷能激活人的胰岛素，着落血糖，有很好的保健浸染，对于糖尿病患者以及肾病病人有未必的疗效。甜茶叶提取的甜茶苷是甜味动物中口感最佳的甜味剂，因其绿色人造，保健低热而在食物、饮料、冷食废品、调味品、医药工业、美容化装品等种种行业中展现出优异的经济价格。

广西甜茶中甜茶苷的含量与其愿望时期无关，区别愿望发育阶段叶子中甜茶苷的含量有着清晰的差距，嫩叶中最高，成叶次之，落叶最低；甜茶叶中甜茶苷的含量与季节也无关连，5月尾较高，6月尾开始回升，7月、8月达到最高，9月尾开始着落，12月尾降到最低值。

甜茶苷作为甜茶中最紧张的功能性成份之一，其含量的测定对于甜茶叶的综合运用十分紧张。

当初国标中尚未针对于甜茶中甜茶苷含量测定的方式，本论文旨在树立功能液相色谱法测定甜茶中甜茶苷含量的实用精确方式，为甜茶苷的开辟运用作出贡献。

2试验全副

2.1仪器及试剂

UltiMate3000功能液相色谱仪：配二极管阵列检测器；合终日平：感量为0.0001g以及0.00001g;KQ-300DB超声波发生器；离神思：转速≥8000r/min;XHF-D高速散漫器；恒温振荡器；移液枪。

乙腈（色谱纯，赛默飞世尔）；无水乙醇、煤油醚（沸点30～60°）、磷酸（合成纯，上海国药化学试剂）；试验用水为超纯水。

甜茶叶：甜茶原叶采摘自广西桂林平乐，经去世板后制患上。

2.2规范溶液的制备

精确称取甜茶苷规范品20mg，用30%乙腈消融且定容至10mL混匀，配制成2.0mg/mL的规范蕴藏溶液。用移液器精确排汇0uL、150uL、250uL、500uL、1000uL、1500uL规范蕴藏液后用30%乙腈溶液稀释至2mL，配制成品质浓度为0mg/mL、0.15mg/mL、0.25mg/mL、0.50mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL的规范系列使命溶液。

2.3甜茶苷样品测定的色谱条件

2.3.1色谱条件

色谱柱：C18柱（柱长250妹妹，内径4.6妹妹，粒径5µm）；行动相：0.05%磷酸溶液+乙腈（68+32）；流速：1mL/min；进样量：5µL；柱温：40℃。

2.3.2检测波长确凿定

选取甜茶苷规范溶液进样，在2.3.1的色谱条件下，利勤勉用液相色谱仪的二极管阵列全波长紫外扫描功能扫描。

2.4色谱出峰评估

按2.3判断的色谱条件，对于甜茶苷含量为0.15mg/mL、0.50mg/mL、1.50mg/mL的规范点（曲线最低浓度点、中间浓度点以及最高浓度点）进样合成，患上到液相色谱图。

2.5甜茶苷测定前解决提取历程的钻研

将甜茶叶经破碎捣毁后备用。

2.5.1区别溶剂对于提取对于甜茶苷含量测定的影响

选取三个甜茶叶样品（称样量约为0.5g），分说选取70%乙醇、纯水以及30%乙腈作为提取溶剂，提取溶剂用量为10mL，超声提取30min，将提取液用提取溶剂定容至25mL，过滤，测定甜茶苷含量。

2.5.2区别提取方式对于甜茶苷含量测定的影响

选取三个甜茶叶样品（称样量约为0.5g），按表1的四种方式妨碍提取，将提取液用30%乙腈定容至25mL，过滤，测定甜茶苷含量。

2.6加标接管试验

称取四份对于立甜茶叶样品，其中一份作为本底，此外三份分说遵照加标量为0.104g/100g、0.264g/100g、0.427g/100g妨碍加标，而后遵照曾经判断的甜茶苷测定方式妨碍测定，合计其接管率。

2.7详尽度试验

在判断的甜茶苷含量测定条件下，对于对于立甜茶叶样品妨碍6次重复测定。运用6次测定服从的RSD对于详尽度妨碍评估。

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相干链接：甜茶苷，胰岛素，乙腈溶液