2.5 冷激卵白的水产结构合成

为更好清晰冷激卵白潜在的生物功能，合成其卵白的物糜瓦氏空间结构。将水产物糜烂希瓦氏菌冷激卵白的烂希氨基酸序列提交到PSＩPRED预料其二级结构，服从见图4。菌冷激卵结构典型的合成冷激卵白的二级结构包罗5个β折叠，预料患上到的水产二级结构与这个服从简陋适宜，Csp1589以及Csp1376二级结构的物糜瓦氏最后一个β折叠泛起断层，这可能是烂希天冬酰胺预料可信度过低所致。

将冷激卵白的菌冷激卵结构氨基酸序列提交SWＩSS-MODEL网站，依据序列相似性及模子品质分说选取1mjc的合成A链、5xv9的水产A链、3i2z的物糜瓦氏B链作为Csp158九、Csp1376以及Csp2252的烂希模板建模。而后，菌冷激卵结构用PROCHECK以及verify3D对于所建三级模子妨碍品质评估。合成构建的糜烂希瓦氏菌冷激卵白三级结构都包罗5个反向平行的β链，其组成为了一个桶状结构，适宜冷激卵白的已经知特色。由拉氏构象图可看出，对于Csp1589卵白模子，氨基酸处于有利区域、特意应承区域、平凡应承区域以及不应承区域的量分说为88.9%，11.1%，0%以及0%。对于Csp1376型卵白模子，对于应值分说为92.7%，7.3%，0.0%以及0.0%。对于Csp2252型卵白模子，对于应值分说为96.1%，3.9%，0.0%以及0.0%，氨基酸全副处于有利区域以及特意应承区域，模子品质较好。在Ｖerify3D服从中，对于Csp158九、Csp1376以及Csp2252模子，平均分≥0.2的氨基酸的量分说是以及100%，89.86%以及100%，平均分≥0.2的氨基酸的量达到80%就觉患上卵白三级模子是及格的，因此，以verify3D服从来看，这3个模子均具备较好的品质。

2.6 冷激卵白的互作卵白及配体散漫位点合成

运用STRＩNG以及COACH网站对于糜烂希瓦氏菌冷激卵白妨碍合成，患上到如图6所示与其细密浸染的卵白质以及潜在的配体散漫位点。对于糜烂希瓦氏菌冷激卵白Csp158九、Csp1376以及Csp2252，STRＩNG分说检测到5，4，10个与其相互浸染的卵白（图6）。与冷激卵白Csp1589存在相互浸染的卵白是组氨酸激酶（ABP76854.1）、甲基转移酶（ABP75296.1）、DNA聚合酶1（polA）、多功能融会卵白（trpC）、同伙卵白（htpG）。与冷激卵白Csp1376存在相互浸染的卵白是组氨酸激酶（ABP76854.1）、DNA聚合酶1（polA）、多功能融会卵白（trpC）、同伙卵白（htpG）。与冷激卵白Csp2252存在相互浸染的卵白是依附ATP的Clp卵白酶（ABP75948.1）、依附ATP的Clp卵白酶适配卵白（ClpS）、组氨酸激酶（ABP76854.1）、DNA聚合酶1（polA）、多功能融会卵白（trpC）、组氨酸磷酸氨基转移酶（hisC）、磷酸庚糖异构酶（gmhA）、含有CBS结构域的卵白（ABP76571.1）、氮调控卵白PtsN（ABP74443.1）、同伙卵白（htpG）。其中组氨酸激酶是一个磷酸化组氨酸激进残基的信号传导酶家族，退出组成双组分信号传导系统。双组分信号传导系统可能感应情景变换，应答情景变换引起的负面效应，钻研表明一些双组分信号转导系统退出了细菌的高以及适应历程，判断糜烂希瓦氏菌冷激卵白与细胞对于逆境的适应无关。DNA聚合酶是DNA复制的紧张酶，冷激卵白可能与DNA复制无关。冷激卵白作为一种同伙卵白，可能与同伙卵白htpG存在相助关连。从合乐成果可判断相较Csp1589以及Csp1376，糜烂希瓦氏菌冷激卵白Csp2252的功能可能加倍重大。在良多紧张的性命行动中，卵白质功能的推广依附于卵白质与配体的相互浸染，对于卵白质配体散漫位点的预料具备紧张的意思。比喻：把小份子放到指标卵白的配体散漫位点，优化配体构象以及位置，使之以及指标卵白有最佳的结协浸染，就有可能发现抑制该卵白的化合物。对于糜烂希瓦氏菌冷激卵白Csp158九、Csp1376以及Csp2252，其分说预料觉2，2，1个可能性较高的配体散漫位点（图6）。

3 论断

冷激卵白是剖析细菌高以及适应的紧张卵白之一。本钻研乐成扩增了水产物糜烂希瓦氏菌的3个冷激卵白基因，并对于其妨碍生物信息学合成，取患上卵白理化性子、结谈判功能方面的相干妨碍。糜烂希瓦氏菌冷激卵白均为亲水的小份子酸性卵白质，皆位于细胞质，为非渗透型、非跨膜卵白，都存在冷激卵白特有的冷休克结构域，存在DNA散漫位点以及RNA散漫基序（motif），能与单链DNA以及单链RNA散漫。糜烂希瓦氏菌冷激卵白Csp1589以及Csp1376与大肠杆菌冷激卵白CspA亲缘关连较近，可能在糜烂希瓦氏菌高以及适应历程中起紧张浸染。冷激卵白的二级结谈判三级结构均适宜冷激卵白家族的特色，其坚贞的三级模子可用于种种对于接以及药物靶向钻研。经由卵白互作以及配体散漫位点的合成，对于其功能有更深的清晰，为后续验证冷激卵白在糜烂希瓦氏菌高以及适应历程中的功能，以及水产物中糜烂希瓦氏菌冷激卵白抑制剂的筛选奠基根基。

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