1 引言

米酵菌酸是食物酸钻椰毒假单胞菌酵米面亚种产生的一种可能引起食物中毒的毒素，具备强烈的中米毒性。该菌产生的酵菌外毒素米酵菌酸对于人体的肝、肾、研妨心、食物酸钻脑等紧张器官均能产生严正的中米侵害，是酵菌引起人们严正食物中毒以及诞生的主要原因。当初对于米酵菌酸尚未特效解毒药物，研妨人们一旦中毒，食物酸钻病去世率高达40%～100%。中米发酵玉米面废品、酵菌蜕变鲜银耳及此外蜕变淀粉类废品是研妨引起中毒的主要原因，罕有的食物酸钻食物有糯米面汤圆、吊浆粑、中米小米或者高粱米面废品、酵菌马铃薯粉条、甘薯淀粉等。

往年10月5日，黑龙江鸡西“酸汤子”事件，九人中毒全副诞生引起关注，“罪魁罪魁”便是米酵菌酸。近多少年来，我国由米酵菌酸引起的食物中毒事件时有发生。2018年7月，浙江省金华市某村落夷易近一家三人食用了含有米酵茵酸的蜕变黑木耳，引起食物中毒，最终一人诞生。2014年6月，云南省文山州广南县村落夷易近食用含有米酵茵酸的吊浆粑加工汤圆，诞生6人。随着食物种类、制作的多样性，对于米酵菌酸的检测能耐以及适应市场快节奏的快捷检测能耐的需要积少成多，本文就米酵菌酸在检测技术方面的钻研现状以及前期偏差妨碍综述，愿望为后续钻研提供参考。

2 米酵菌酸的前解决以及检测方式

2.1 米酵菌酸的提取传染

米酵菌酸的提取主若是运用种种有机溶剂对于样品的指标物资妨碍萃取。溶剂的抉择主要取决于米酵菌酸的化学特色，米酵菌酸含有三个羧基为弱酸性有机化合物，因此接管的有机溶剂平凡为甲醇、乙酸、乙腈等有机溶液及碱性溶液，同时也要思考样品杂质及基质对于提取以及后续检测步骤的影响。在运用质谱为检测伎俩的试验中，因为米酵菌酸重大电离出H+离子，因此多接管ESI负离子模式，在电离中基质尽管不会影响到标物的别离度，可是在其离子化历程中会产生基质效应，从而影响标物的峰型、定性及定量。以是在提取传染中，针对于相同样品，接管溶剂、柱体、试验步骤都需要重复调试。当初国内的较为干流的前解决方式有固相萃取法、Qu ECh ERS法。

2.1.1 固相萃取法

当初固相萃取法在米酵菌酸中的运用曾经至关成熟，个别为超声波震撼提取，运用SPE固相小柱妨碍传染。国内的此类方式截然区别，针对于样品的区别，主要区别在于提取溶剂的搭配、用量、SPE的抉择。

国标法GB5009.189-2016前解决中接管180 m L的甲醇-氨水溶液，还需静置1 h、超声波震撼30分钟、水浴、氮吹。该方式解决历程耗不断间长、步骤啰嗦且斲丧少许有机溶剂，曾经被逐步被淘汰。

针对于银耳样品，周鹏等钻研中以10 m L甲醇为提取剂，主要提取伎俩为一再超声波震撼，审核运用搅浑强阴离子替换柱传染提取液，1%氨水及氨水甲醇交替淋洗。此前解决方式步骤少、有机溶剂少许削减，对于仪器及溶剂的要求都极低。

基于液质联用伎俩，覃冬杰等检测柳州螺狮粉中的米酵菌酸，钻研表明样品量10 g、甲醇浓度75%、超声光阴20 min、甲醇量50 m L为最优提取条件，以MAX固相萃取柱为传染条件，水与甲醇交替淋洗。

基于液质联用伎俩，曾经雪芳等检测米粉及河粉中的米酵菌酸，其接管15 m L甲醇氨水溶液提取样品，超声波震撼，运用搅浑型阴离子替换柱传染提取液，水与甲醇交替淋洗。

基于液质联用伎俩，王俊虎等检测六神曲中的米酵菌酸，其接管10 m L甲醇为提取液，运用Oasis Max强阴离子替换柱传染样品，水与甲醇交替淋洗。

可见无论是国标法仍是后续的改善方式，针对于差此外样品、差此外基质，反相固相萃取法提取米酵菌酸有未必的纪律。即接管未必浓度的甲醇溶液提取，超声波震撼，运用搅浑型阴离子替换柱传染提取液，后续的钻研均证实此种前解决方式均能知足米酵菌酸定性定量的要求。

2.1.2 Qu ECh ERS法

Qu ECh ERS包罗提取以及传染2个全副，提取溶剂接管乙腈，传染接管散漫固相萃取(dispersed solid phase extraction,d-SPE)，此方式与反相固相法差距比照大，因为具备快捷、重大、经济、功能、耐用、牢靠的诸多短处，宽泛运用于区别基质中农药多残留检测的样品前解决。当初此法在米酵菌酸的运用，在国内唯逐个篇论著。梁明，胡均鹏等接管乙腈-水为溶剂，d SPE EMR-Lipid吸附剂，解决样品，钻研表明当乙腈体积分数为80%时，提取成果最佳，但着实验步骤比上述的固相萃取法稍显重大。此方式提取速率快、溶剂运用量少、传染小、价格高尚、操作啰嗦，无需优异磨炼以及较高本领即可很好地实现，文中样品为河粉，此方式在酵米面废品中米酵菌酸的检测具备较高价格的探究性。

以上两种方式的区别见表2。

2.1.3 生物样本的提取

生物样本与食物样本材质上具备很大的区别，因此提取方式跟上述的方式有不小的区别。

基于液质联用的检测方式，徐小夷易近等提取血浆中的米酵菌酸，接管乙腈为提取剂，搅浑型强阴离子替换柱萃取，水与甲醇交替淋洗。

基于液质联用的检测方式，张秀尧等提取尿液中的米酵菌酸，以3%高氯酸以及正己烷为提取剂，历经漩涡、离心、氮吹患上待测液。

2.2 米酵菌酸的检测方式

近些年来针对于米酵菌酸的检测陈说比照少见，因此米酵菌酸的检测方式也比照缺少。如今干流的检测伎俩有功能液相色谱法、功能液相色谱-串联质谱、荧光层析法。

2.2.1 功能液相色谱法(HPLC)

针对于米酵菌酸化学特色，份子易保存于酸性情景，因此在色谱行动上，接管反相固相法，酸性行动相，使其保存增强，出峰光阴推延，峰形对于称性更好。

食物牢靠国家规范GB5009.189-2016[6]中色谱条件接管反相固相法，水用冰乙酸调p H至2.5，进样量为20μL。苏永远及侯佰立的功能液相色谱测定米酵菌酸均接管了此色谱条件，值患上一提的是，侯佰立试验中对于行动相妨碍测试，发如今行动比照例为78︰22，峰形对于称锋利。此检测方式进样量大，导致基质效应清晰，易受样品基质干扰致使定性定量泛起偏差。基于功能液相色谱，李红艳等钻研极管阵列检测器散漫固相萃取法快捷测定食物中米酵菌酸残留，紫外检测器依据保存光阴定性，检测服从可能存在假阴性，极管阵列检测器，经由保存光阴以及光谱扫描定性实现样品定性，比以往的功能液相方式精确重大，而又比液质法自制，易于宽泛。液相色谱法有其自身的规模性，当样品中标物浓度较低时，每一每一检测不进去。

2.2.2 功能液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)

功能液相色谱法受基质干扰较大，液质联用法样品前解决重大、进样量小、大大削减试剂斲丧量、灵便度高、且兼别离、定性(份子结构信息)、定量为一体，延迟了合成光阴，是如今迷信钻研中主要的检测伎俩。液质法检测米酵菌酸，色谱中大全副接管酸性行动相，好比0.1%甲酸溶液-乙腈、乙腈-0.1%甲酸的10 妹妹ol/L梯度洗脱，配合反相固相法妨碍别离。质谱中，均为电喷雾离子源(ESI)、负离子模式、多反映监测(MRM)；在二级质谱中，针对于米酵菌酸的结构特色及官能团电离晃动性，大少数钻研者选定m/z 441.三、m/z 397.二、m/z 485.1为定性离子或者定量离子。值患上关注的是，周鹏等[7]在对于米酵菌酸的钻研表明样品进样量在5u L之内时，进样量与指标物响应值呈线性关连，再次削减进样量，对于指标物响应值的普及量越来越少，因此抉择2 u L进样量，值患上参考。曾经雪芳等接管UPLC-MS/MS测定米粉以及河粉中的米酵菌酸，色谱条件为运用搅浑型阴离子替换柱，以0.1%甲酸为行动相，其钻研服从表明在酸性行动相中。米酵菌酸色谱峰峰型更好，质谱响应更强。

2.2.3 免疫层析快捷检测法(ICA)

免疫层析法的道理是将抗原或者抗体包被于固相载体硝酸纤维膜上，检测时将样品加到试纸上的样品垫，样品在毛细管浸染下前移与符号探针相互浸染组成复合物，可经由肉眼或者对于借助信号网络仪器对于显色服从遏制定性或者定量合成。

张小波等人运用荧光层析法开辟了米酵菌酸荧光定量检测卡。其道理因此米酵菌酸-牛血无辜卵白偶联物作为检测卡的包被质料，部署于硝酸纤维素膜上，而后将上海优晶生物科技有限公司自制的BA单克隆抗体与光阴分说微球符号放入微孔中，包被后的膜以及符号后的微孔组装成快捷检测卡。该检测卡的实用检测畛域为1～100 ng/m L，可实现米酵菌酸现场快捷定性定量检测。但该方式制备检测卡步骤重大、老本高，市场需要缺少以反对于，如今尚未量产。

3 总结以及展望

米酵菌酸耐热性极强，任你煎、炸、煮、炖都不能破损它的毒性，而其致去世率极高，因此在斲丧关键、销售关键的检测显患上尤为紧张。当初国内米酵菌酸的试剂盒方式依然十分缺少，期待研发。日后，为实现更不便快捷、定性、定量、现场检测的要求，还应在将胶体金、酶联免疫、免疫层析等快捷检测方式与今世合成技术相散漫钻研开辟新型食物牢靠快捷检测技术方面勤勉。

申明：本文所用图片、翰墨源头《广东化工》，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割删除了

相干链接：米酵菌酸，提取液，氨水