1.7RNA抽提以及基因表白合成

抽提拟南芥愿望20d的白菜叶片RNA妨碍RT-PCR的基因表白量检测。RNA抽提、型油性状反转录以及RT-PCR等挨次详见Fan等的菜s传合成份方式BrCLV3以及内参基因18SrRNA的表白检测引物对于分说为DXP109/DXP129以及18SrRNAF/R，序列详见表1。多室的遗

2 服从与合成

2.1 多室白菜型油菜srb的判断角果形态合成

对于多室白菜型油菜srb的花器官以及角果变异妨碍审核以及合成发现,其花器官数目变异与多室黄籽沙逊ml4相似,即：花萼以及花瓣等花器官数目个别；雄蕊数目根基个别，但在少少数花中可能审核到7个(图1-a～j)；雌蕊相干于WT清晰增粗。白菜srb的型油性状角果多室性状遗传晃动，单株多室角果比例94.7%～100.0%，菜s传合成份平均为97.9%，多室的遗每一角果具备3～4个心皮(平均3.5个心皮)。判断多室角果平均长、白菜宽以及厚分说为37.0、型油性状6.4以及3.8妹妹；较两室角果显患上短而粗。菜s传合成份

对于子房妨碍石蜡切片审核，多室的遗WT资料的判断子房为两室，是由2个心表面对于发育成一个残缺的假隔膜，将心皮分割成2个腔室，假隔膜双侧分说着生1列种子；srb的三室子房则由3个心皮向中间发育组成“Y”字型假隔膜，将角果分割成3个腔室，假隔膜上着生3列种子，果皮分为3瓣(图1-x)；在srb以及ml4的四心皮子房内，2个近乎平行部署的假隔膜将子房内腔分开成3个腔室，中间的腔室比双侧的腔室大，中间的腔室着生2排胚珠，而双侧的腔室各着生1排胚珠，其假隔膜的横切面呈“Ⅱ”型(图1-y)。

2.2 白菜型油菜srb多室性状的遗传合成

为判断srb中多室性状的遗传纪律，将其与两室白菜型油菜WT妨碍正反交，F₁单株全副呈现为两室，表明srb中的多室性状由隐性核基因操作，且无细胞质效应(表2)。在F₂别离群体中，两室表型单株(78株)与多室表型单株(23株)适宜3∶1的别离比(χ2=0.27，P＞0.05)。表明srb中的多室性状受1对于隐性核基因操作。

为判断srb中的多室基因是否与咱们前期克隆的多室基因Brclv3相同，进一步将srb与ml4妨碍等位魔难发现，它们的正反交F1以及F2别离群体的所有单株全副呈现为多室(表2)。表明srb中的多室基因与ml4中的多室基因等位,因此它们的多室性状可能均由BrCLV3基因的突变所导致。

2.3 白菜型油菜srb中多室候选基因BrCLV3的克隆与序列合成

咱们对于srb中的BrCLV3等位基因的编码区、2.3kb的启动子区以及2.5kb的3'端侧翼序列妨碍比照测序。与WT中的BrCLV3序列比对于合成，共发现3处碱基序列变异(图2-a)。其中，位于3'真个SNP差距以及第2个内含子中ATAT插入/缺失差距都不会引起该基因卵白序列的改动,而位于第3个外显子中的C/G单核苷酸突变可导致编码卵白的1个氨基酸替换。进一步比照ml四、srb以及Chiifu-401(已经宣告基因组序列的白菜，两室表型)之间的氨基酸序列差距发现,该突变氨基酸位于CLEmotif的第12位，由组氨酸突酿终日冬氨酸，将其命名为Brclv3_Asp12；它与前期在ml4中发现的CLEmotif上的碱基变异区别，因此Brclv3_Asp12是一个新的等位突变,可引起CLV3多肽信号的序列突变(图2-b)。在拟南芥中,CLEmotif是CLV3多肽信号份子的紧张功能域,由12个激进的氨基酸组成,其中第12位组氨酸对于连结茎顶端分负气关的巨细至关紧张。因此，本钻研新发现的第12位His-to-Asp氨基酸替换可能影响BrCLV3基因的个别功能发挥，从而影响角果的个别发育。

2.4 Brclv3Asp12等位基因特异的SNP符号在别离群体中的表型共别离验证

针对于Brclv3_Asp12中的C/G单核苷酸变异开辟了特同性的SNP符号，并对于srb×WT杂交产生的F2别离群体妨碍了BrCLV3基因型的判断。服从表明，BrCLV3纯合基因型(AA)单株都为两室角果表型,Brclv3_Asp12纯合基因型单株(aa)都为多室角果表型，杂合基因型单株(Aa)呈现为两室或者近乎两室角果表型(图3)；3种基因型单株的比例(AA∶Aa∶aa)适宜1∶2∶1的别离比(χ2=0.80，P＞0.05)。该服从证实Brclv3_Asp12中的C/G变异与多室表型共别离，表明该SNP变异可能是引起srb中多室角果产生的原因。

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