2.3低压抑备方式确凿定

初始方式为鲁南新时期生物技术有限公司在50妹妹低压抑备液相(汉邦科技，低压制备型液相色谱系统，抑备NS4000)上开辟，纽莫因此二氯甲烷、康定甲醇以及水系统制备纽莫康定B₀，中试钻研国内外未见详尽报道。低压张宇等接管了氯仿、抑备甲醇以及水系统，纽莫笔者以二氯甲烷妨碍试验，康定毒性低于氯仿，中试钻研价格也低于氯仿，低压放大斲丧具备未必的抑备优异性。初始方式：将纽莫康定B₀粗品(品质分数为81.2%，纽莫HPLC检测如图1所示，康定纽莫康定B₀的中试钻研色谱纯度为88.58%、纽莫康定C₀的色谱纯度为8.78%)用甲醇、二氯甲烷搅浑溶液(V(甲醇)∶V(二氯甲烷)=1∶4)消融，波长276nm；柱温20～30℃；流量70mL/min；上样量1.7g；行动相，V(二氯甲烷(工业))∶V(甲醇)∶V(水)=43∶9∶1；操作压力5～5.5MPa。收集B₀的HPLC色谱纯度>95%的制备液。纽莫康定B₀的色谱纯度值以及纽莫康定C₀的色谱纯度值是经由面积归一化法患上到的。以线性原则放大到中试150妹妹制备柱(Cs-prep150工业制备色谱系统，汉邦科技)，流量调整为630mL/min；进样量15.3g；其余巩固。在此根基上，对于该方式妨碍了进一步优化。

2.3.1行动比照例的优化

依据正相色谱特色，经由调控二氯甲烷，对于行动比照例妨碍优化。在初始方式中，试验合成了V(二氯甲烷(工业))∶V(甲醇)∶V(水)的5个比例对于纽莫康定B₀制备别离的影响，试验服从如表2所示。

由表2可知：随着二氯甲烷比例的削减，纽莫康定B₀峰的保存光阴逐步削减，B₀峰别离度逐步增大，B₀峰以及相邻峰的重合越小。其中，41∶9∶1以及42∶9∶1的行动比照例比照，后者B₀别离度高于前者，且B₀峰型较好，保存光阴相差不大。保存光阴越长，斲丧老本越大。综合思考B₀的别离成果以及斲丧老本，故抉择V(二氯甲烷(工业))∶V(甲醇)∶V(水)=42∶9∶1。

2.3.2上样量的优化

上样量在色谱制备中影响着指标峰的别离度及制备功能。因此，在行动比照例判断为V(二氯甲烷(工业))∶V(甲醇)∶V(水)=42∶9∶1的根基上，试验选取了3种进样量(7.5，11.4，15.3g)对于纽莫康定B₀制备的成果妨碍钻研，试验服从如表3所示。

上样量越大，别离度越小。对于区别上样量下的B0峰妨碍分段收集，并对于B0的HPLC色谱纯度大于95%的料液妨碍并吞、减压稀释以及冻干，患上到冻干粉的品质分说为3.01，4.7，4.8g。3种冻干粉B₀品质分数分说为95.73%，95.77%，95.63%，相差不大。合计收率分说为47.31%，48.63%，36.95%，其表白式为

式中：X为上样液对于应粗品质量；Y为粗品B0品质分数。

由表3可知：上样量11.4g收率高于上样量7.5，15.3g。收率高，则在中试、大斲丧中预示着低老本、功能益，以及制药企业在市场中较高的相助力。因此，综合思考对于纽莫康定B₀的别离成果以及收率，抉择11.4g上样量。

2.3.3洗脱流速的优化

在低压抑备液相色谱中，洗脱流速影响柱压、峰型，进而影响到制备功能及成果。故在判断行动比照例V(二氯甲烷(工业))∶V(甲醇)∶V(水)=42∶9∶1及上样量11.4g的根基上，审核了5个洗脱流速(480，530，580，630，680mL/min)对于纽莫康定B₀制备的影响，服从如表4所示。

由表4知：洗脱流速越大，柱压越高，峰型越窄。对于区别洗脱流速下的B₀峰妨碍分段收集，并对于B₀的HPLC色谱纯度大于95%的料液妨碍并吞、减压稀释以及冻干。流速越大，患上到的洗脱并吞液体浸逐步减小，且减小幅度不大。最终患上到的冻干粉品质分说为4.71，4.70，4.72，4.73，4.72g，其各数值相差很小。

随着流速的削减，柱压逐步削减，而试验所用150妹妹低压抑备系统使命压力为0～7MPa。随着进样次数的削减，柱压会逐步增高，再生柱子会越频仍，如斯会占用未必的工时以及斲丧再生溶剂，削减斲丧老本。此外，在5个流速下，冻干粉的收率以及B0品质分数相差不大。综上思考，优选480mL/min的流速作为150妹妹的制备柱流速。

2.4纽莫康定B0的低压色谱制备

以优化后的低压抑备条件，在150妹妹制备柱上妨碍纽莫康定B₀的制备。对于B₀峰分段收集，陆续进样，并吞纽莫康定B₀的HPLC色谱纯度大于95%的制备液。将并吞液妨碍减压稀释，冻干，患上到纽莫康定B₀冻干粉。

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