马铃薯粉痂病（Potato powdery scab）是马铃由粉痂菌（Spongospora subterranea f. sp. subterrane）引起的真菌性病害，主要危害根部以及块茎，薯块式也可能使茎患病。茎及痂病菌快捷检建树粉痂菌以休眠胞子囊球随种薯或者病残体越冬。土壤病薯以及土壤中病残体为病害的样品初侵染源，远距离转达主要依靠种薯，中粉田间转达主要经由浇水、测方病土、马铃病肥等。薯块式马铃薯粉痂病能使马铃薯产量削减10%～20%，茎及痂病菌快捷检建树重者可达到 50%。土壤

我国内蒙古、样品广东、中粉贵州、测方江西、马铃浙江、云南、吉林、甘肃、福建等地均有马铃薯粉痂病的发生，外洋良多国家以及区域，如以色列、美国、巴基斯坦、哥斯达黎加、韩国、意大利等均有报道。因为粉痂菌不强家养作育，国内对于马铃薯粉痂菌检测的钻研较少，其防治药剂成果也较差，因此，针对于马铃薯粉痂菌，亟需建树快捷、灵便、精确性高的检测方式，为该病害的早期监测以及防御提供重
要依据。

已经报道的土壤带菌量的检测方式有诱饵法、ELISA 法以及 PCR 检测。Hui 等以番茄幼苗作为诱饵，检测到马铃薯重茬 0～10 cm 土壤中的马铃薯粉痂病菌。可是番茄幼苗诱饵法只能检测到土壤中粉痂病菌活的游动胞子，无奈检测到休眠胞子且检测光阴较长、操作啰嗦。Liu 等运用棉花黄萎病的病原菌菌丝卵白作为抗原，制备该病原菌菌丝卵白的多克隆抗体，建树特同性检测棉花黄萎病菌的间接 ELISA 方式，但因为真菌结构与物资组成重大,追寻特同性抗原有很浩劫度；近些年来，因为 PCR 技术愈加速速、精确、不便而被宽泛运用于病原菌的检测以及定量钻研。Guo 等[21]经由筛选区别疮痂菌的通用探针，建树了马铃薯疮痂菌的快捷 PCR 检测方式，实现为了对于病机关以及土壤样品的快捷检测；Nian 等经由建树实时荧光定量 PCR 系统从而快捷精确判断了小麦黑穗菌（Tilletia controversa Kühn），运用于小麦矮腥黑穗病的早期诊断。

Graff 等依据马铃薯粉痂菌外部转录距离区妄想了一对于巨细为 61 bp 的特同性引物 SsTQF1/SsTQR1 以及一个荧光 Taqman®探针 SsTQP1，可能检测以及定量悬浮在水中或者与粘土搅浑的休眠胞子堆。Qu 等[24]依据马铃薯粉痂菌外部转录妄想了巨细为 434 bp SSF/SSR 引物，该钻研乐成地运用于有无粉痂病症状的带菌马铃薯块茎的检测，可能检测到1/g土的胞子球。鉴于当初缺少对于马铃薯粉痂菌快捷、精确的检测方式，本钻研基于马铃薯粉痂菌外部转录距离区以及线粒体 DNA，分说妄想了适用于开始检测的平凡PCR 特同性引物以及实时荧光定量 PCR 特同性引物，建树了快捷、高灵便性的检测系统。针对于在斲丧中马铃薯粉痂病危害严正，缺少病原菌快捷检测的方式的状态。本钻研经由筛选特同性好、晃动性高的粉痂菌特同性引物，建树马铃薯粉痂病快捷检测系统，以期为马铃薯粉痂病的早期预警提供技术反对于。

1 资料与方式

1.1 供试菌株

试验所用的粉痂菌（S. subterranea）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、葫芦科刺盘孢菌（Colletotrichum lagenarium）、尖孢镰孢菌（Fusarium oxysporum）、大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）、核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）、茄匍柄霉菌（Stemphylium solani）、疫霉菌（Phytophthora infestans）、多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）、细极链格孢菌（Alternaria tenuissima）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、疮痂链霉菌（Streptomyces scabies）均由中国农业迷信院蔬菜花卉钻研所别离保存（表 1）。

1.2 DNA 提取

马铃薯粉痂病斑或者作育基平板上作育一周的菌丝体，接管动物基因组 DNA 提取试剂盒提取动物基因组或者病原菌基因组 DNA。混有休眠胞子囊的菌土以及田间土壤总 DNA 提取接管 TIANamp Soil DNA Kit 土壤基因组 DNA 提取试剂盒提取土壤总 DNA。NanoDrop 2000定量 DNA 浓度，保存于-20℃备用。

1.3 引物妄想

依据 NCBI GenBank 中已经注销的马铃薯粉痂菌及其余非靶标菌的规范菌株基因序列（表2），运用DNAMAN 8.0 软件比对于，选取粉痂菌外部转录距离区以及线粒体 DNA 的激进区域，妄想了两对于运用于平凡 PCR 的特同性引物 A5: 5'-ACAACTCTTAACAGTGG-3'，A9: 5'-AATGGTTAGAGACGAATC-3'，C3: 5'-AATCTAGAGCACCCCGTTTTCATTCG-3'，C8: 5'-TGCGCAAACCTTAATACGGGAA-3'，扩增产物巨细分说为 281 以及 391bp；以及一对于实时荧光定量 PCR 的特同性引物 QF: 5'-GCAACTAAATAAAATTTAATGCTAAAAGTG-3'，QR:5'-TTTGTACGCTAAGTTCGATAGGAG-3'，扩增产物巨细为 104 bp（图 1）。引物均由北京博迈德基因公司分解。

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