1.4 试验药品及试剂

碳酸氢钠、连翘氯化钾、叶乙于家影响硫酸镁、醇提肠滑葡萄糖、取物其对磷酸二氢钠、鼠蓖氯化钠、麻油氯化钙、性腹泻活性及性缩氯化铁、兔离体空氯化铝、腻肌醋酸钾[成都市科隆化学品有限公司]，自觉钻研氯乙酰胆碱[成都中原化学试剂有限公司（中国成都）]，连翘蓖麻油（河南省华龙药业有限公司），叶乙于家影响维拉帕米[Medchemexpress有限公司（美国）]，醇提肠滑洛哌丁胺[西格玛化学公司（美国圣路易斯）]，取物其对色谱乙腈（成都市科隆化学品有限公司），鼠蓖纯化水（杭州娃哈哈总体有限公司），盐酸[成都市科隆化学品有限公司]、氯化铁、甲醇（重庆腾华化工有限公司）、醋酸钾以及氯化铝用于粗提物的动归天学合成。蒸馏水（四川优普超纯科技有限公司）用于制备规范溶液、稀释液以及心理盐溶液（Tyrode溶液）。

1.5仪器

家兔类通用试验工具，HW-400E恒温滑腻肌槽（四川成都泰盟公司），BL-420F生物性能试验系统（四川成都泰盟公司），FT-100生物张力传感器（四川成都泰盟软件有限公司），优普纯水/超纯水制作系统（四川优普超纯科技有限公司），HH600-2B三用恒温水浴箱（金坛市科析仪器有限公司），电热恒温鼓风去世板箱（YDYQ,101-2A），破碎捣毁机（天津市泰斯特仪器有限公司，FW177），电子合终日平（Mettle AE 240），旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂，RE-52AA），真空减压去世板箱（武汉奥普森试验配置装备部署有限公司，ZK 6050B）。

1.6 试验动物

选取110只瘦弱昆明牝牡小鼠（18～22 g）以及42只瘦弱家兔（2.0～2.5 kg），由川北医学院动物中间提供[答应证编号：SYXK(chuan)2013-076]，小鼠以及家兔饲养于23～26℃、湿度适量的试验室情景，12 h光照黝黑循环，时期可从容进食以及饮水。本试验适宜中国动物呵护委员会的打点，并凭证动物伦理以及试验原则。

1.7 试验方式

1.7.1 FS ext的急性毒性

取60只禁食4 h（可从容饮水）的小鼠随机分为0.5 g/kg FS ext试验组、1.0 g/kg FS ext试验组、2.0 g/kg FS ext试验组、4.0 g/kg FS ext试验组、8.0 g/kg FS ext试验组、16.0 g/kg FS ext试验组，每一组10只，分说给以0.5 g/kg、1.0 g/kg、2.0 g/kg、4.0 g/kg、8.0g/kg、16.0 g/kg的FS ext妨碍灌胃，解决后的小鼠可从容饮水进食，记实14 d内小鼠的诞生状态以及毒性迹象，建树响应的剂量-效应曲线，从而判断FS ext的对于折致去世剂量（LD50），以判断其牢靠性[9]。

1.7.2 对于蓖麻油性腹泻的影响

另取50只小鼠随机分成阴性组、阴性组、0.25 g/kg FS ext试验组、0.50 g/kg FS ext试验组、1.00 g/kg FS ext试验组，每一组10只，阴性组给以0.9%氯化钠溶液（20 ml/kg）灌胃，阴性组给以洛哌丁胺（4 mg/kg）灌胃，0.25 g/kg FS ext试验组、0.50g/kg FS ext试验组、1.00 g/kg FS ext试验组分说给以0.2五、0.50、1.00 g/kg FS ext。给药30 min后，小鼠均给以蓖麻油0.4 ml灌胃，而后将每一只小鼠放入径自的笼子中，地板衬有吸墨纸，将线网部署在离底部3 cm的笼中以使小鼠与吸墨纸离隔。审核4 h内如下指标：初始半固体粪便光阴，固体、半固体、液体粪便数目。接管腹泻指数（EI）评估腹泻的严正水平。EI=固体粪便数目×1+半固体粪便数目×2+液体粪便数目×3。

1.7.3 离体标本制备

选取瘦弱家兔，试验前禁食24 h，从容饮水。用木槌击致头昏，剖解家兔，以胃幽门与十二指肠接壤处为起始部，取空肠并赶快放入通有95%O2以及5%CO2搅浑气的台氏液中，将内容物冲洗腌臜并剪去肠系膜，剪成1.5～2.0 cm数段，一端用线结扎牢靠于通气沟，另一端牢靠于张力换能器。给以前负荷1 g，浴槽内温度连结在（37.0±0.5）℃，通气沟以每一秒1～2个气泡的速率不断通入搅浑气，待基线晃动后开始试验。

1.7.4 FS ext对于家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短的影响

待空肠滑腻肌张力晃动后，单剂量退出FS ext(0.0一、0.0三、0.十、0.30、1.00、3.00、10.00 mg/ml，这些浓度是累加所患上，即后一个的浓度由前一个浓度累加，主要指标是为了审核家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短随FS ext的浓度变换而变换的趋势），以给药前的张力为100%，记实给药后空肠滑腻肌自觉性缩短的张力变换。遵照上述方式，用维拉帕米（0.0一、0.0三、0.十、0.30、1.00、3.00、10.00μmol/L）解决家兔离体空肠滑腻肌作为比力，记实给以维拉帕米后家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短的张力变换。

1.7.5 FS ext对于由乙酰胆碱（ACh）以及KCl诱导的家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短的影响

待空肠滑腻肌张力晃动后，分说退出ACh(10μmol/L）以及KCl(60妹妹ol/L）预解决，泛起最大波峰后，赶快用台氏液冲洗肠管，等其晃动后，再次分说退出ACh(10μmol/L）以及KCl(60μmol/L),15 min后，退出FS ext使其终浓度分说达0.0一、0.0三、0.十、0.30、1.00、3.00、10.00mg/ml，并记实空肠滑腻肌自觉性缩短晃动时的张力变换。遵照上述方式，用维拉帕米（0.00一、0.0十、0.100、1.000、3.000μmol/L）解决家兔离体空肠作为比力，重复上述步骤，并记实此时空肠滑腻肌自觉性缩短晃动时的张力变换。

1.7.6 FS ext对于由CaCl2诱导的家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短的影响

为判断FS ext对于Ca2+内流的影响，首先让肠管处于Tyrode溶液中，待其张力晃动后，将Tyrode溶液换为含EDTA的无Ca2+高K+溶液，不断30 min以从机关中作废Ca2+。再将溶液换为不含EDTA的无Ca2+高K+溶液，不断15 min，而后再退出FS ext(0.三、1.0 mg/ml），构建CaCl2(3×10-5～3×10-2 mol/L）的量-效曲线，审核给以区别剂量FS ext后家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短率的变换。在退出维拉帕米（1μmol/L）的状态下，构建CaCl2(3×10-5～3×10-2 mol/L）的量-效关连曲线，审核空肠滑腻肌自觉性缩短率变换。在不FS ext以及维拉帕米预解决的状态下，将3×10-2 mol/L CaCl2诱导的家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短率觉患上是100%[12]。

1.8 统计学方式

接管SPSS 19.0软件妨碍数据合成，计量资料以呈现，组间比照用单因素方差合成。以P<0.05为差距有统计学意思。

2 服从

2.1 动归天学合成

2.1.1 开始动归天学合成

对于FS ext的开始动归天学合成表明其含有酚类、皂苷类以及黄酮类化合物。

2.1.2 总黄酮的含量

FS ext中黄酮含量的测定表明，黄酮含量为8.13 mg/g。

2.1.3 功能液相色谱法检测FS ext中的化学成份

接管功能液相色谱法对于FS ext中的化学成份妨碍检测，服从呈现，FS ext中主要含连翘苷以及连翘酯苷A。在上述1.3.3的色谱条件下，连翘苷以及连翘酯苷A的别离度优异，空缺、搅浑规范品、样品的色谱图见图1。

2.2 FS ext的急性毒性

在丈量LD50的试验历程中，小鼠按区别剂量的FS ext妨碍灌胃后，在审核期内未泛起任何诞生或者毒性迹象。单次给以FS ext的剂量为16g/kg，小鼠在审核期内未泛起任何的诞生及行动变换。

2.3 FS ext对于小鼠蓖麻油性腹泻的影响

5组初始半固体粪便光阴以及EI比照，差距有统计学意思（P<0.05）。阴性组初始半固体粪便光阴长于阴性组、0.25 g/kg FS ext试验组、0.50 g/kg FS ext试验组，差距有统计学意思（P<0.05);1.00 g/kg FS ext试验组初始半固体粪便光阴长于阴性组、0.25 g/kg FS ext试验组，差距有统计学意思（P<0.05）。阴性组EI高于阴性组、1.00 g/kg FS ext试验组，差距有统计学意思（P<0.05);0.25 g/kg FS ext试验组、0.50 g/kg FS ext试验组EI高于阴性组，差距有统计学意思（P<0.05，见表2）。

2.4 FS ext对于家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短的影响

台氏液对于家兔离体空肠滑腻肌自觉性缩短无清晰影响，差距无统计学意思（P>0.05，见图2）。FS ext对于家兔离体空肠滑腻肌呈现出剂量依附性解痉浸染，即半最大效应浓度（EC50)=1.21 mg/ml(1.11～1.26mg/ml,n=6），见图3。图形相似于维拉帕米（0.01～10μmol/L），其EC50为0.51μmol/L(0.42～0.59μmol/L,n=6），见图4。

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