茶酒，单枞的抗按斲丧工艺主要分为配制型茶酒以及发酵型茶酒。茶酒其中，氧化配制型茶酒是活性将茶叶在酒中浸泡，再经勾兑、评估调配等工艺制成的单枞的抗酒精饮品；而发酵型茶酒则因此茶叶为主料，以糖、茶酒果蔬汁等为配料，氧化经酵母或者酒曲发酵而成的活性饮用酒。当初，评估无论是单枞的抗配制型茶酒仍是发酵型茶酒，酒精度个别在20％vol如下，茶酒且酒中含有良多茶叶活性物资，氧化因此平凡将茶酒归为低度保健型酒。活性

据报道，评估茶酒中个别含有未必量儿茶素、没食子酸(GA)等活性成份。儿茶素以及GA作为紧张的食物削减剂，其抗氧化活性已经患上到了宽泛钻研。但当初对于茶酒的抗氧化活性钻研报道很少，仅何婷婷报道了一款发酵型普洱茶酒的抗氧化活性，觉患上该茶酒具备优异的复原能耐以及翦灭超氧从容基的能耐。

单枞茶酒是咱们课题组以单枞茶为质料研制的一款发酵型茶酒。本钻研先对于单枞茶酒的儿茶素及没食子酸妨碍功能液相色谱(HPLC)测定，而后从方面临单枞茶酒的抗氧化活性妨碍综合评估：(1)复原能耐的测定；(2)翦灭从容根基事的测定；(3)抗氧化能耐指数(ORAC)的测定。这三方面是抗氧化活性的主要测定方式，特意ORAC测定是当初抗氧化钻研畛域钻研热门、运用宽泛的一项紧张评估方式。本钻研可为单枞茶酒的保健功能钻研提供根基数据以及事实参考。

一、资料与方式

一、试验资料

单枞茶酒，本课题组制备，详尽制备工艺如下：以潮州凤凰单枞茶(一级品)为质料，先按茶水比1：40(g/mL)加85℃水浸提茶叶10min以取患上茶汁，而后加人蔗糖至糖度为15^oBx。再削减30g，L硫酸铵作为氮源，并以柠檬酸调pH至4.0。将茶酒酵母T-5(酿酒酵母ATCC204508经茶汁驯化而患上，本单元收藏)接入麦芽汁作育成浓度为10⁶cfu/mL的种子液，而后削减到茶汁中妨碍发酵。发酵条件：接种量为体积百分比3.1％，发酵温度为21℃，发酵光阴8d。茶酒制备竣事后密封避光蕴藏。

二、主要药品试剂

乙腈以及甲醇(色谱纯)，美国J.T.Baker公司；4种主要儿茶素标品表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子酸儿茶素(EGC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)及没食子酸(GA)标品，纯度均≥98％(HPLC)，合肥博美生物科技有限责任公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2，2’-联氮-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)、2，2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐(AAPH)、水溶性维生素E(Trolox)，美国Sigma-Aldrich公司；荧光素钠(FL)，美国Fluka公司；甲酸、L(+)-抗坏血酸、K₂S₂0₈、K₃[Fe(CN)₆]、Na₂HP0₄、NaH₂P0₄、三氯乙酸(TCA)、FeCl₃、食用酒精、十二烷基硫酸钠(SDS)、邻苯三酚、水杨酸、H₂0₂、Al(N0₃)₃、FeS0₄、NaN0₂、Na₂S₂0₃、NaOH、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、硫酸铵、柠檬酸、乙醇、盐酸等均为国产合成纯；pH8.OTris-盐酸缓冲液的配制：精确称取121.1gTris于1000mL容量瓶中，退出800mLdd水，短缺搅拌消融。再退出42mL盐酸，dd水定容。

三、主要仪器配置装备部署

KQ-300VDE三频超声波震撼器，上海五相仪器仪表有限公司；Agilent1260LC功能液相色谱仪，美国AGILENT公司；MK3型酶标仪，芬兰ThemoLabsystems公司；U-3010型紫外可见分光光度计，日本HTACHI公司；TDL-16C型高速台式离神思，上海安亨迷信仪器厂；HH-8型数显恒温水浴锅，金坛市精达仪器制作厂，96孔荧光板，丹麦NUNC公司。

四、试验方式

（1）单枞茶酒中儿茶素以及GA的HPLC测定

先将儿茶素以及GA标品分说配成5mg/mL的单标溶液，而后再混并吞配成l、二、四、八、十、20mg/L的混标溶液，而后妨碍HPLC测定，建树各标品的标曲方程。而后再将茶酒样品HPLC测定，并经由标曲方程合计出茶酒中的儿茶素以及GA含量。

HPLC色谱条件：AgilentZORBAxSB-C₁₈(4.6×250妹妹，5μm)色谱柱；行动相：乙腈(A)，0.2％甲酸水溶液(B)；流速：1.2min；柱温：25℃；进样量：10μL；紫外检测波长：278nm；梯度洗脱，挨次如表1。

（2）单枞茶酒复原能耐的测定

复原能耐测定依据的是物资供电子能耐巨细的道理。参考何婷婷的方式并作改善。在5支10mL试管中分说滴入0.一、0.二、0.三、0.四、0.5mL单枞茶酒，分说用dd水补至1.0mL，退出0.2mol/LpH6.6的磷酸缓冲液2.5mL，再退出1％的K₃[Fe(CN)₆]2.5mL，振荡混匀，而后于50℃水浴中反映15min并迅速冷却。退出10％的TCA1.0mL，振荡混匀，4000r/min离心5min。取上清液2.5mL，退出2.5mLdd水以及0.5mL0.1％的FeCl₃，混匀后静置15min，于700nm波短处测定吸光度Ao，以dd水替换Fecl₃作空缺，操作如上，测出吸光度氏，用两吸光度差值呈现复原能耐巨细，即：复原能耐=A₁-Ao。

将食用酒精与蒸馏水勾兑，使酒精度达到单枞茶酒的酒精度8.35％vol。而后将该勾兑酒及0.1mg/mL的抗坏血酸作为比力，测定方式如上。

（3）单枞茶酒翦灭从容根基事的测定

单枞茶酒对于DPPH·、ABTS·、·OH以及O₂·四种从容基的翦灭能耐强弱，也可作为反映单枞茶酒抗氧化活性强弱的一项依据。分说对于单枞茶酒翦灭上述从容基的能耐妨碍测定，同时，各测定历程中均以0.1mg/mL的抗坏血酸作比力。

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