菌落的菌落意见

菌落（colony）:细菌在固体作育基上经作育落伍展孳生而组成的能被肉眼所识此外愿望物集落，它是总数由恒河沙数的相同细菌汇聚而成的。（陈说单元：CFU）

菌落总数的测定界说： 样品经由解决，在未必条件下作育后(如作育基成份、菌落作育温度以及光阴、总数pH、测定需氧性子等)，菌落所患上1mL(g)检样中所含菌落的总数总数。所患上服从包罗一群在方式则则的测定条件下愿望的嗜中温的需氧以及兼性厌氧菌。

仪器与耗材

样品稀释液：

一、菌落 磷酸盐缓冲溶液（pH=7.2±0.2）（倡导运用）

二、总数0.85%心理盐水

作育基： 平板计数琼脂（PCA）（作育基的测定质控及验收）

魔难步骤

样品稀释

固体以及半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸盐缓冲稀释液或者心理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1min～2min，菌落或者放入盛有225 mL稀释液的总数无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，测定制成1:10的样品匀液。

液体样品：以无菌吸管排汇25mL样品至盛有225mL磷酸盐缓冲稀释液或者心理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适量数目的无菌玻璃珠)中，短缺混匀，制成1:10的样品匀液。

梯度稀释
用1mL无菌吸管或者微量移液器排汇1:10样品匀液1mL，沿管壁飞快注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（留意吸管或者吸头尖端不要波及稀释液面），振摇试管或者换用1支无菌吸管重复奏乐使其搅浑平均，制成1:100的样品匀液。

按上述操作制备10倍系列稀释样品匀液。每一递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或者吸头。

作育

假如样品中可能含有在琼脂作育基外表弥漫愿望的菌落时，可在凝聚后的琼脂外表拆穿困绕一薄层琼脂作育基（约4mL）。

琼脂凝聚后，将平板翻转，36℃±1℃作育48h±2h。水产物30℃±1℃作育72h±3h。 

服从计数

可用肉眼审核，须要时用放大镜或者菌落计数器，记实稀释倍数以及响应的菌落数目。菌落计数以菌落组成单元（Colony Forming Units，CFU ）呈现。

选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无伸张菌落愿望的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记实详尽菌落数，大于300CFU的可记实为多不可计。每一个稀释度的菌落数应接管两个平板的平均数。 

服从合计陈说一
若惟独一个稀释度平板上的菌落数在适合计数畛域内，合计两个平板菌落数的平均值再将平均值乘以响应的稀释倍数，作为每一g(ml)中的菌落总数服从。

合计典型1：

 合计：（164+160）/2×10²＝16200＝16000  

服从合计陈说二

若有两个陆续稀释度的平板菌落数在适合计数畛域内时，按公式（1）合计：

N——样品中菌落数；

ΣC——平板（含适量畛域菌落数的平板）菌落数之以及；

n₁——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；

n₂——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；

d——稀释因子（第一稀释度）。 

合计典型2：

服从合计陈说三

若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对于稀释度最高的平板妨碍计数，其余平板可记实为多不可计，服从按平均菌落数乘以最高稀释倍数合计。

合计典型3：

合计：（320+312）/2×103 ＝316000＝320000

服从合计陈说四

若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数合计。

合计： （16+15）/2×10 ＝155＝160

服从陈说

菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数陈说。    

例:（78+77）/2×100  ＝77.5（78）    

陈说：菌落总数（ CFU/mL ）78

大于或者即是100时，前第3位数字接管“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，前面用0替换位数来呈现服从；也可能用10的指数方式来呈现，此时也按“四舍五入”原则修约接管两位实用数字。

例：（228+217）/2×10¹＝222.5（223）×10¹＝2200    

陈说：菌落总数（ CFU/mL ）2200（或者2.2×10³）

若所有平板上为伸张菌落而无奈计数，则陈说菌落伸张。若空缺比力上有菌落愿望，则这次检测服从实用，需重新检测。

菌落计数以菌落组成单元（colony-forming units，CFU）呈现，报服从：  

称重取样以CFU/g为单元陈说，体积取样以CFU/mL为单元陈说。

留意事变

1.试验历程中应配置空缺比力。如空缺比力有菌落愿望，则本次试验实用，并对于稀释液、吸管、平皿、作育基、试验情景等妨碍传染源头合成。

2.试验中所运用的试验耗材必须是残缺灭菌的，重复运用的耗材应残缺洗涤腌臜，不患上有残留物。

3.为保障对于计数作育基低压灭菌的成果，倡导每一瓶作育基低压时，体积不宜超过400mL 低压灭菌后，作育基中的琼脂会散漫在底部，应摇匀后运用在作育箱中，为防御中间平皿过热，高度不患上超过6个平皿。