2.2 萃取溶剂对于烟碱的基于碱影响

烟碱是强极性的有机物，易溶于水以及甲醇，紫外该试验选取区别浓度的分光法检盐酸、氢氧化钠、光度氨水以及甲醇审核区别溶剂的测烟萃取成果（表2）。

由表2可知，品评区别浓度的辩说甲醇溶液中烟碱含量总体高于氢氧化钠溶液，与氨水以及盐酸萃取成果无清晰性差距。基于碱依据许燕娟等的紫外钻研服从，碱性溶液的分光法检强度对于烟碱萃取率有较大影响，相同浓度下氨水溶液比氢氧化钠溶液检测到的光度生物碱种类多。相似地，测烟Li等用区别浓度氨水萃取烟叶中的品评生物碱，发现6%氨水好于此外浓度，辩说也好于氢氧化钠溶液。基于碱综合思考到甲醇溶液比照氨水以及盐酸溶液有利于样品溶液的贮存以及液相色谱柱以及具备较好的抑菌性，因此，接管5%甲醇作为后续试验的萃取溶剂。

2.3 萃取光阴对于烟碱萃取率的影响

超声、微波等罕用于辅助萃取试验，可是它们在普及萃取率的同时，也会带来更多杂质，这对于接管紫外分光光度法检测十分倒楣，因此，抉择较为以及顺的常温震撼法妨碍萃取。由表3中可能看出，随着萃取光阴的缩短，萃取率着落，而在2五、30 min时无清晰差距，为保险起见接管30 min作为萃取光阴。

2.4 烟碱含量测定公式的品评辩说与拟合

原公式以236以及282 nm为梯形的中位线法判断杂质在259 nm处的干扰。由图1可能看出，因为杂质的干扰，萃取液的紫外罗致谷底由烟碱的236 nm红移至240～242 nm处，而与之等距离的是276～278 nm。但从图1中可能看出，在波长小于278 nm时，4种规范样品溶液的紫外吸光度与波长组成的斜率较大，为减小误差而检测279～282 nm处吸光度。因此，以240、259以及282 nm的吸光度用于新公式的拟合。烟碱含量以HPLC法检测服从为基准。

从表4中吸光度与烟碱含量的相干性服从可能看出，烟碱含量与240 nm相干性挨近清晰水平，这是因为烟碱在240 nm有紫外罗致，但又有杂质干扰造成的；与259 nm处吸光度相干性达到清晰水平，这正是接管该方式道理地址。烟碱与282 nm处的吸光度相干性较差，这是因为烟碱在该处无罗致（图1），其吸光度是因为杂质的干扰。而样品溶液在240、259以及282 nm处的吸光度之间呈极清晰相干性，这正好诠释杂质对于这3个波短处的吸光度影响不同，这正是原公式建树的根基。

以20个烤烟样品在240、259以及282 nm处的吸光度为自变量，以HPLC检测烟碱含量为因变量用SPSS软件拟合回归患上到拟合方程为：

C=（0.080 7+0.426 9×A259 + 0.473 9×A240 -0.631 2×A282）V/m

式中，C为烟碱含量/%，A259，A240以及A282分说为样品溶液的吸光度，V为样品溶液体积/L，m为烟样品质/g。

再分说以2个公式对于残余57个烟叶样品烟碱含量妨碍合计，而后分说将合计服从除了以HPLC检测服从，则比值越挨近1诠释检测越精确。由图3可能看出，全副样品的原公式合计服从与HPLC检测服从的比值根基呈正态扩散，且在0.75～1.25的全副占49.12%；而烤烟样品的比值在0.75～1.25的占55.88%，会集度略有降职；对于晾晒烟样品，其比值也呈正态扩散，但会集度较烤烟低，0.75～1.25的仅占39.13%。全副样品的拟合公式合计服从与HPLC检测服从的比值根基呈正态扩散，0.75～1.25的占61.40%，高于原公式；烤烟样品的比值在0.75～1.25的占76.47%，会集度有大幅降职；对于晾晒烟样品其会集度较低，比值在0.75～1.25也是仅占39.13%，可是比值在0.5～0.75以及1.25～1.60的分说由17.39%、21.74%降职至26.09%、30.43%。可能看出，2个公式的服从均是烤烟会集度高于晾晒烟，这是因为：1） 2种方式的建树根基为烤烟，2） 晾晒烟的杂质对于吸光度的干扰有差距。

3 品评辩说与论断

4种规范烟叶样品的紫外扫描呈现，3种晾晒烟的图形不同而与烤烟有差距，呈现为峰谷比值前三者较为挨近，以及罗致波长大于276 nm后的走势呈飞快着落而烤烟的紫外罗致简直巩固，诠释区别烟草规范的杂质对于罗致的影响有所差距。经由对于区别萃取溶剂的审核发现，甲醇、盐酸以及氨水萃取功能较高，抉择甲醇作为萃取溶剂，是因为较好的抑菌性，而且有利于样品溶液的保存以及对于色谱柱友好。

原公式建树的根基是朗伯比尔定律即烟碱含量与吸光度成正比。可是在实际测定历程中，因为检测仪器等的误差，规范曲线概况拟合曲线平凡呈线性关连而非正比关连。此外，该试验紫外扫描图以及文献中均呈现烟碱在236 nm处有未必的紫外罗致，而不是无罗致，以是不能将236 nm处的吸光度全副作为杂质。样品溶液在240、259以及282 nm处的吸光度之间存在极清晰相干性诠释杂质对于这3处的吸光度影响较为不同，这正是2个公式建树的根基。经由2个公式的合计服从与HPLC服从的比值扩散可能发现，对于烤烟样品，新拟合公式的精确度较原公式有大幅降职；而对于晾晒烟样品则不清晰降职，这是因为2个公式的建树均因此烤烟为根基而建树的，可是晾晒烟的杂质与烤烟不相同，这在紫外扫描图中也有所反映。下一步将收集更多晾晒烟样品，以建树更适用于它们的合计公式。

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