杨树叶枯病是种木由半知菌亚门的链格孢菌(Al-ternariaalternata(Fr．)Keissl3引起的一种杨树叶部病害，它既能危害插条苗，霉菌又会熏染实生苗，对于的抑发病最重者整株叶片全副枯去世。杨树叶枯研该病从杨树叶片抽生开始，病致病菌危害杨树叶片、菌活嫩梢以及幼茎，性钻5-6月患病最重，种木受益的霉菌叶片会泛起近圆形、多角形或者不法则形的对于的抑病斑，直径可达1～5妹妹，杨树叶枯研病斑多时可连成大斑，病致病菌病斑上有玄色霉状物，菌活嫩梢以及嫩茎上的性钻病斑突出，呈菱形，种木上有绿色霉层。该病原菌寄素性不强，但寄主畛域很广，常发生在农作物、经济作物、果树、蔬菜及杂草上，近些年来又在用材林树种及绿化树种上发现，受益区域宽泛，主要会集在我国西南、西北、华北区域。而用材林上细链格孢菌，最先发现于一些杨树杂交种类的叶部，组成少许的坏去世型病斑，造成叶枯，延迟落叶。杨树叶枯病可危害毛白杨、小叶杨、小青杨、清白杨、北京杨等多种杨树，对于杨树苗木及幼林造成严正危害；如近多少年发生在北京市西南旺苗圃的毛白杨近年受此病的危害，1981年叶片感病率达100％，叶片少许提前脱落，四川省天全县杨树苗圃2000年感病率达85％以上，同时在黑龙江省也曾经大面积发生，导致良多苗圃的苗木诞生，给林业斲丧造成为了很大的经济损失，已经成为影响当地杨树低劣高产的主要因素之一，找到治疗之法已经兵临城下。

当初，因为化学杀菌剂对于情景、人体带来的副浸染以及病原菌日益清晰的抗药性，新的治疗方式的出台势在必行，运用木霉菌作为生物杀菌剂的钻研引起了天如下国的宽泛喜爱。木霉菌(Trichoder-eelviride)是人造界中宽泛存在并有充实资源的拮抗微生物，罕有于动物残体及动物粪便上，从动物的根围及种子、球茎外表即可别离到，具备宽泛适应性、产生拮抗物的多样性、寄生的广谱性以及对于情景影响小等特色，成为最有愿望的生防因子。该菌是紧张的动物真菌病原菌的抑制菌，具备较强的适应性，经由营养争取、重寄生、产生抗性物资或者消融酶类可能抑制良多病原菌，因此深入钻研、开辟以及斲丧优异木霉菌，对于防治动物真菌病害，增长斲丧具备紧张意思。在木霉菌的种群中有一大类被称为拮抗(T.viride)。钩状木霉(T.hamatum)、长枝木霉(T.10ngibrachiatum)、康氏木霉(T．koningii)以尽起初归为粘帚霉属的绿粘帚霉(Gliocladiumvirenstrichodermavirens)都属于拮抗类，但当初农业生防上商业化的产物主若是哈茨木霉菌株及大批的绿色木霉菌株，它们在植病生防中正日益受到重视，运用技术也不断突破。多年来，人们对于木霉菌的生防运用、生物药剂的开辟以及生防机制做了良多试验以及深入钻研。国内外良多学者将其用于防治水稻纹枯病，如今，木霉还可能用于叶面、花器以及果实的呵护：在葡萄园内用绿色木霉的胞子液于始花期至收获期喷施，可能着落灰霉引起的藤蔓侵蚀以及果然实蕴藏期的侵蚀，实用地防治灰霉病。在杨树烂皮病的生防钻研中发现：木霉对于烂皮病菌也有较好的防治成果，林间防治杨树烂皮病治愈率达92.4％，防御成果达82.4％。茆振川报道了木霉菌对于苹果轮纹病的抑制作用，而且外洋已经有商品化的木霉制剂问世，如美国的Topshield(哈茨木霉T-22菌株)以及以色列的Trichodez(哈茨木霉T39菌株)；同时在国内，也曾经有对于其防治白涓病、猝倒病、灰霉病等的报道。木霉的拮抗机制也是多样性的，平凡有相助浸染、抗生浸染、重寄生浸染等。据不残缺资料统计，木霉至少对于18个属29种病原真菌在体外或者体内呈现有拮抗浸染。当初叶枯病的防治，在很洪流平上仍是依附于化学防治，平凡从病提倡头在全部愿望季节喷洒2～3次的40％的乙膦铝300倍液，或者75％百菌清500倍液，或者50％的多菌灵l000倍液防治，并经由实时清理枯枝落叶带出林外会集销毁或者埋沤制肥的方式削减病源，从而削减发病率。运用化学方式防治杨树叶枯病时，化学药物在抑制病原菌的同时也将杀去世树体上有利的拈抗微生物，同时也会使病原菌产生抗药性并传染情景。在可不断发展呼声越来越高的明天，化学公害越来越严正，木霉作为一类资源充实的拮抗微生物，在动物病害生物防治中饰演着越来越紧张的脚色；同时，随着今世生物技术的不断发展，木霉的生防成果以及晃动性有了清晰的普及，并展现出宽绰的运用远景；这些为木霉菌对于杨树叶枯病的抑制作用提出了可能。

1 资料与方式

1.1 试验资料

1.1.1 试验菌种

病原菌：病株取样杨叶枯病病菌

生防菌：绿色木霉、哈茨木霉

1.1.2 作育基的制备

1.2 作育基的制备

试验所用作育基均接管PDA作育基。

配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钠3g，琼脂20g，水1000mL；

将洗净后带皮的马铃薯切碎，退出定量的水煮沸30min，用纱布滤出马铃薯残渣，退出琼脂，加热使琼脂残缺消融，再退出糖，并补入过多的水，使最后的总量依然为原量。分装在试管以及三角瓶中，而后灭菌备用。

1.2 病原菌的分说

1.2.1 症状审核

选取具备典型杨树叶枯病症状的杨树叶片审核，其症状如下：早期，感病叶片上产生隐约可见的褐色斑，日后病斑逐步扩充。病斑黄色，中间褐色。前期，病斑上产生黑褐色霉状物，为病原菌的分生胞子梗以及分生胞子。病斑可相互连成大斑，全叶枯去世。

1.2.2 病原茵审核及判断

选取具备典型症状的杨树叶片病部，妨碍镜检。间接用针挑取少许菌丝体，放在加有水点的载玻片上，加盖玻片后在显微镜下镜检。

1.3 病原菌的别离以及纯化

1.3.1 杨树叶枯病病原茵的别离

抉择新发病的植株器官或者机关作为分理资料而后妨碍机关外表消毒，消毒时先用70％酒精浸泡病机关2～3S，赶走病机关外表气泡，而后用次氯酸钠消毒，消毒后用灭菌水冲洗2～3次。

次氯酸钠消毒液配方30％(现配现用)：次氯酸钠(NaCl0₃)，30g；水，100mL。

取杨树叶枯病的病叶，间接用移植钩挑取菌株的菌丝，接种于PDA平板中间，于25℃恒温箱中作育3d。3d之后，审核各菌落形态，间接用针挑取少许的菌机关放在加有水点的载玻片上，加盖玻片后在显微镜下检视，依据菌落形态，判断病原菌。

1.3.2 杨树叶枯病病原茵的纯化

接管微块单孢别离法，挑取供纯化菌种的胞子少许加于试管内的无菌水中，摇动搅浑1～2min使胞子短缺散开。调节胞子浓度到10倍视线中2～5个胞子。取此胞子悬浮液2～3mL倒入4％水洋菜平板外表，僻静左右摇动作育皿使胞子液平均展布于作育基外表静置5min，使大全副胞子积淀，而后歪斜作育皿，用吸管吸去过剩的胞子液。用灭菌刀将带有散漫胞子的水洋菜平板切成0.3cm×0.3cm小块，移至载玻片上魔难。逐个魔难，见有单个胞子的微块，随即用移植铲移入PDA作育基中作育，每一皿可放4～5块。

1.4 试验方式

在直径9cm作育皿的PDA平板作育基上，相距3CiTi分说接入直径0.6cm作育5d的近乎同质、等量的杨树叶枯病病原真菌以及木霉菌(Trichoder-maspp．)。比力则在平板中间各接入直径0.6cm的杨叶枯病病原菌以及木霉菌(Trichodermaspp．)。每一个解决配置5个重复，置于生化作育箱中，用散射光、25℃作育。每一12h丈量菌落的半径，陆续审核3d。

拮抗服从合计时，接管两菌落相向半径妨碍拮抗愿望测定。

因为拮抗真菌抑制病原真菌的同时，其自身也被病原真菌所抑制，因此在合计拮抗成果时，接管相对于抑菌成果，即拮抗真菌被抑制1％个单元所产生的成果。被抑制率与相对于抑菌成果的合计m1如下：

被抑制率-[(径自作育菌落半径)-(菌落趋势半径)]／(径自作育菌落半径)×100％；

相对于抑菌成果=病原菌被抑制率／拮抗菌被抑制率。

申明：本文所用图片、翰墨源头《防护林科技》，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割

相干链接：杨树叶，杨树叶成份合陋习范物资，杨树花，磷酸二氢钠，琼脂